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无处自怨自艾

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量低浓度扩增不出目的条带

大家好!本人最近刚开始做绝对荧光定量,目前纠结于荧光定量标准曲线的制作。
我将原浓度为1.26乘以10的9次方的质粒模板10倍稀释,一次为108 107 106 105 104 103 102。结果上机的时候发现,前面4个稀释度的溶解曲线可以看到是单一的,后面3个稀释度,似乎就没有看见目的基因理论所处温度处的峰了,而是杂峰,不知道为什么啊!相当郁闷!求各位大神帮忙
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2013-08-22 16:28:25
后面3个梯度浓度太低了,就会呈现杂峰状态,我扩阴性的时候也这样,只要CT值对就行了
2楼2013-08-22 13:56:12
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无处自怨自艾

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-08-22 13:56:12
后面3个梯度浓度太低了,就会呈现杂峰状态,我扩阴性的时候也这样,只要CT值对就行了

必须删除后面的三个点,标曲才合格,但是只有4个点的标曲明显不合格。请问是不是退火温度太低了啊。
3楼2013-08-27 10:44:00
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 无处自怨自艾 at 2013-08-27 10:44:00
必须删除后面的三个点,标曲才合格,但是只有4个点的标曲明显不合格。请问是不是退火温度太低了啊。...

可以调高一点试试看,不过也不一定行
4楼2013-08-28 10:14:47
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