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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量低浓度扩增不出目的条带
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无处自怨自艾

新虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量低浓度扩增不出目的条带

大家好！本人最近刚开始做绝对荧光定量，目前纠结于荧光定量标准曲线的制作。
我将原浓度为1.26乘以10的9次方的质粒模板10倍稀释，一次为108 107 106 105 104 103 102。结果上机的时候发现，前面4个稀释度的溶解曲线可以看到是单一的，后面3个稀释度，似乎就没有看见目的基因理论所处温度处的峰了，而是杂峰，不知道为什么啊！相当郁闷！求各位大神帮忙
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1楼 2013-08-20 15:57:03
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-22 16:28:25
后面3个梯度浓度太低了，就会呈现杂峰状态，我扩阴性的时候也这样，只要CT值对就行了
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2楼2013-08-22 13:56:12
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无处自怨自艾

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ivyvampire at 2013-08-22 13:56:12
后面3个梯度浓度太低了，就会呈现杂峰状态，我扩阴性的时候也这样，只要CT值对就行了

必须删除后面的三个点，标曲才合格，但是只有4个点的标曲明显不合格。请问是不是退火温度太低了啊。
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3楼2013-08-27 10:44:00
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ivyvampire

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 无处自怨自艾 at 2013-08-27 10:44:00
必须删除后面的三个点，标曲才合格，但是只有4个点的标曲明显不合格。请问是不是退火温度太低了啊。...

可以调高一点试试看，不过也不一定行
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4楼2013-08-28 10:14:47
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