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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖电泳rna ,跑成这样,是怎么回事?求指导

Sample Text

我做的是马氏珠母贝的外套膜和边缘膜的RNA的提取

操作步骤是这样的:
1、样品早上10点从贝中提取出来,接着在液氮中冻存并保存了4个小时
2、下午2点做,用于depc处理过的2微升管取样并加入tirzol  1ml,加入小钢珠,用匀浆器匀浆8分钟
3、用镊子取出小钢珠,放置5min
4、加入氯仿200微升,涡旋30s
4、12000r,4℃,15min
5、吸取上清400微升于depc处理过的1.5ml离心管中,异丙醇400微升
6、室温放置10min
7、12000r,4℃,10min
8、弃去上清,加入1ml 的75%depc配置的乙醇,剧烈震荡
9、12000r,4℃,5min
10、在垂直层流操作台晾干10min,加入20微升的depc水溶解(没有pcr ,也没有测过其浓度,师姐说不用,测没意义)。
11、琼脂糖凝胶电泳 ,其余样品-80℃保存。
12、琼脂糖凝胶的配置:
        凝胶浓度:1%   
       电压:120V
       电流:60MA
       跑的时间:30min
缓冲液:0.5xTBE
琼脂糖电泳rna ,跑成这样,是怎么回事?求指导
RNA电泳图.PNG

[ Last edited by 键盘上的脚丫 on 2013-8-19 at 20:53 ]
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-08-20 11:37:36
键盘上的脚丫: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-08-20 18:04:02
贝类?建议先查找资料看是否有人提取过同类型的样品。
有些样品的RNA并不是都3条带的。我提取只有一条带的物种,也有一些其28非常弱,基本不可见。
你可以电泳时点一个正常样品(动物肝脏或水稻)的total RNA
marker右边第二个孔那是明显降解;但第一、三、四几个并没有明显的拖尾。后面两个是上样量过多。
伟大航线....
6楼2013-08-20 10:08:01
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2013-08-20 12:20:43
恩恩,我准备去测一下od值先,下午再跑一次电泳,谢谢吖...

测OD也无法判断呵,只能大概看看纯度和产量什么的。
应该是样品本身RNA就长这个样子。
伟大航线....
12楼2013-08-21 12:08:58
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