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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这琼脂糖电泳时咋回事呀？
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 这琼脂糖电泳时咋回事呀？

我昨晚上做的PCR，取了3ul电泳检测了下，条带挺清晰，今天早上我想再做个琼脂糖电泳做胶回收，可是就跑成这样了，是1%的胶，是电压和电流不合适造成的吗，求高手解答，金币不是问题


[ Last edited by zhang8826857 on 2012-3-11 at 10:48 ]
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好孩子！
1楼 2012-03-11 10:45:23
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回帖置顶 ( 共有1个 )

srlee

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+15): ★有帮助 多谢多谢，应该就是缓冲液的问题 2012-03-11 14:10:23
西瓜(金币+3, MolEPI+1): Good! 2012-03-11 15:36:21
实验做的多了，这种现象很正常：
一可能你的胶的问题，要么微波溶的不好，要么胶的浓度没有把握好，要么胶还没有凝好就电泳了等等！
二可能你的电泳缓冲液问题，由于TAE中含有冰醋酸容易挥发或缓冲液放久了水分挥发引起缓冲液浓度变化，导致缓冲能力会下降，造成跑胶结果不稳定。而TBE就稳定的多，具体你可以参见电泳仪上的电流变化！
三建议如果是片段回收的话，最好要换新的电泳液，既可以方便割胶也可以降低污染的几率！
祝实验顺利！
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3楼2012-03-11 11:32:42
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普通回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+5): ★有帮助 谢谢啦^_^ 2012-03-11 14:07:14
是不是缓冲液用久了没换？
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2楼2012-03-11 10:50:26
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+10): ★有帮助 多谢多谢，应该就是缓冲液的问题 2012-03-11 14:10:38
小丹木木(金币+3, 专家考核): 西瓜斑斑，我顶你啊。 2012-03-12 10:18:44
如3楼所言，最好每次电泳都用新的缓冲液，不然很容易污染其他DNA。
Maker都没跑好，应该就是胶和缓冲液的问题了。
胶回收最好用大孔，这样琼脂块会小很多。
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4楼2012-03-11 11:45:46
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牛红

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857(金币+10): ★有帮助 多谢多谢，应该就是缓冲液的问题 2012-03-11 14:10:51
如果两次电泳凝胶相同浓度的话，出现这种问题的极可能是因为凝胶或电泳缓冲液的问题，缓冲液切胶回收最好用新缓冲液
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赢得不够是因为心智还不够高远
5楼2012-03-11 13:45:08
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我爱沈泉

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone(金币+1): 也可能啊 2012-03-12 15:46:23
zhang8826857: 金币+2, ★有帮助 2012-03-20 16:42:12
估计应该是胶的问题啊 以前我也遇到不少啊 但换了新的琼脂糖 就搞定了。。。
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6楼2012-03-12 10:05:16
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dxzhaomiao

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1949stone(金币+1): 可能 2012-03-12 15:46:12
zhang8826857: 金币+2, ★有帮助 2012-03-20 16:42:20
我也曾经遇到过这种情况的，换一下缓冲液吧，我当时是因为50×的缓冲液稀释的时候没有摇匀，重新稀释就好了，跟你跑的结果很像
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7楼2012-03-12 14:17:58
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holygoof

新虫 (小有名气)
如果有任何疑问或建议，请google
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8楼2012-03-12 15:39:30
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伊依雪儿

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+1, ★有帮助 2012-03-20 16:42:24
我也出现过这种情况，缓冲液的问题，重新换一下缓冲液就好了
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9楼2012-03-12 18:22:50
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tapmun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, ★有帮助 2012-03-20 16:41:58
我也出现过这种情况，当时一个一个排除原因，做了好多次，结果，重新购买琼脂糖，就好了。
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业精于勤荒于嬉，行成于思而毁于随
10楼2012-03-13 08:59:51
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