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xnbioinfor

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】琼脂糖电泳1×TAE配的不好 用什么后果

取了20ml 50×TAE, 定容到1000ml， 晃了几下，然后就用来制胶了，但是PCR电泳的结果不好， 条带很弱，而且上午跑出来的几条带，竟然没跑出来。现在怀疑1×TAE没混匀，这样会导致什么样的后果呢？ TAE怎么配 才能让结果完美呢
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1楼 2011-01-18 10:17:58
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-18 15:08:14
引用回帖:
Originally posted by xnbioinfor at 2011-01-18 10:17:58:
取了20ml 50×TAE, 定容到1000ml， 晃了几下，然后就用来制胶了，但是PCR电泳的结果不好， 条带很弱，而且上午跑出来的几条带，竟然没跑出来。现在怀疑1×TAE没混匀，这样会导致什么样的后果呢？ TAE怎么配 才能让 ...

TAE没混匀，离子强度和pH就有问题，对电泳肯定有影响。
要让结果完美也不单单是TAE的问题了，各个步骤都要注意。
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2楼2011-01-18 10:34:25
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feng__

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-01-18 15:32:58
MAKER有问题么？

貌似也不至于跑不出来条带吧，不匀的话应该是条带不是直的，歪歪扭扭的那样吧 ，呵呵，么试过#17
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3楼2011-01-18 10:35:50
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天使托

专家顾问 (职业作家)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1): 完全溶解很重要 2011-01-18 15:33:13
首先要确保缓冲液混匀了，然后溶胶也要完全溶解。
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4楼2011-01-18 10:46:14
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real339

金虫 (正式写手)
★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
经常也是这么配的啊，不至于这么大问题吧
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5楼2011-01-18 11:18:35
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real339

金虫 (正式写手)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-01-18 15:33:35
如果你确定不是点样，染色，DNA等原因那可能真是胶的问题了
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6楼2011-01-18 11:19:47
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hello466725

金虫 (初入文坛)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-18 15:08:50
都是这么配的。
如果PCR做的过程不出任何问题，TAE摇匀跑，电泳不会出问题哒。
要是没有摇匀，最多就是跑出来条带不整齐，但不至于跑不出来。
跑不出来的话，得考虑你的PCR条件问题了。
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7楼2011-01-18 12:22:06
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haitian0625

金虫 (小有名气)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1): 谢谢参与 2011-01-18 15:33:50
我感觉电泳液对于一般的电泳而言，没有太大要求的。
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8楼2011-01-18 14:56:42
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rainwander

铁杆木虫 (知名作家)
★ ★
xnbioinfor(金币+1):谢谢参与
silicare(金币+1): marker 是个好东西 2011-01-18 15:34:10
对了，你的Marker怎么样？有条带吗？

如果Marker有条带的话，那就不是TAE跟胶的问题了，

如果Marker也没有条带，那就可能是TAE跟胶的问题。
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9楼2011-01-18 15:10:04
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skkyy88888

铜虫 (著名写手)
★
silicare(金币+1): 不排除这个原因 2011-01-18 15:34:20
应该是染料的问题吧。
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10楼2011-01-18 15:31:09
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我每次都是用一升量筒配TAE，盖住量筒口上下颠倒几次，效果挺好的；
不只是这样，电泳槽里缓冲液加新的也要拿梳子之类的搅一下，否则跑出来不好看，嘿嘿，这些是我的小建议。
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11楼2011-01-18 19:17:29
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luckyzhumin

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
先要看下Marker条带是否清晰了，如果清晰，就是你DNA样品的问题了，如果Marker也不清晰，那就可能是染料与样品比例没控制好，也可能制胶时琼脂比例或缓冲液的问题了。
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12楼2013-03-17 22:06:58
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