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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » TA克隆关于蓝白斑筛选
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lyz65956

木虫 (正式写手)

[交流] TA克隆关于蓝白斑筛选 已有1人参与

大家好，第一次做TA克隆，想问一下，在板子上长出的单个白斑就是克隆吗？是直接挑取培养后验证就可以吗？是否需要划线分离单克隆再验证？
想要保存菌种的话直接用液体LB加甘油就可以吗？如果不加甘油可以 在4度放多久？
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对自己更好点
1楼 2013-08-16 19:45:52
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qingtianli

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
挑白菌肯定是对的，不过板子也不要轻易丢掉，我们遇到过极品的事情，挑的白菌抽不到质粒，无奈之下，挑了几个蓝菌反倒测序成功了，有解释说白菌是污染菌，蓝菌是因为插入片段没有破坏酶的活性。
TA克隆效率比较高，如果觉得培养验证麻烦的话，可以先用菌落PCR验证。划线分离单菌当然更好了，不过通过测序了一般就没问题。
保存菌种LB加甘油-80度就可以。
4度1-2周一般没问题的。如果嫌低温冰箱不方便，有时候加点甘油在-20度冻一管，或者划个平板，4度下撑的时间感觉比液体LB长些。
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lyz65956
2楼2013-08-17 03:46:06
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lyz65956

木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by qingtianli at 2013-08-17 03:46:06
挑白菌肯定是对的，不过板子也不要轻易丢掉，我们遇到过极品的事情，挑的白菌抽不到质粒，无奈之下，挑了几个蓝菌反倒测序成功了，有解释说白菌是污染菌，蓝菌是因为插入片段没有破坏酶的活性。
TA克隆效率比较高， ...

感谢您不畏黑夜的精彩解答~
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对自己更好点
3楼2013-08-17 13:52:41
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