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T载体连接不上去
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fanwq258
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[交流]
T载体连接不上去
自己扩增的基因,连接T载体就是连不上,但是买载体时带的插入片段可以连接上,这可该怎么办呢?
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2013-08-05 09:53:35
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5楼
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flyhigh805
at 2013-08-05 17:16:03
你的目的片段大小是多少啊,太大的话连T载可能有点困难,但是只要优化连接条件连上去应该很容易的。应尝试提高PCR产物的浓度,可以取少量PCR产物电泳检测如果大小正确的话剩下的PCR产物直接过胶回收的柱子,这样得到 ...
我的目的片段也就是800多,浓度在25ng/UL左右,买载体是带的片段也就700多bp,浓度是50ng/UL,我就是按照自带片段的浓度加的,可是就是连接不上
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6楼
2013-08-05 18:43:10
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gyesang
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你是什么酶扩出来的片段,如果是高保真酶的话,你考虑加A尾了吗?
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2楼
2013-08-05 13:35:34
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2楼
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Originally posted by
gyesang
at 2013-08-05 13:35:34
你是什么酶扩出来的片段,如果是高保真酶的话,你考虑加A尾了吗?
不是高保真的酶,用的就是宝生物普通的ex taq
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3楼
2013-08-05 14:51:24
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考虑下连接条件、片段大小及各种成分的量
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4楼
2013-08-05 15:24:40
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