24小时热门版块排行榜    

查看: 1918  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hyc_charles

金虫 (小有名气)


[交流] 关于PCR和PAGE胶

这段时间一直在做分子标记,被PCR整的够呛,卡在选扩这已经2个月了,产物总是时有时无,同样的材料重复一次,结果都会不一样或者什么都没有了,换了所有的试剂,换了新设计的引物,结果一样,真是快崩溃了。
另外就是PAGE胶,跑过的人都知道,这个也是很熬人的,做一次大半天就耗进去了,但扩增产物又只能用这个来检测,不然看不清楚,跑胶真是门艺术,中间的不可控步骤太多,这些都会造成你的结果不同。
有没有经验人士,遇到同样的问题,大家交流交流~
祝大伙实验顺利!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不卑微的我

银虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by hyc_charles at 2013-07-23 12:47:05
加油加油,坚持顶住,我还真不信我做不出来了!...

嗯 顶住。我已经做了20多天了,看三楼分析的挺好。找到原因分享一下哦
7楼2013-07-24 12:55:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

不卑微的我

银虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我现在也是碰到同样的问题。之前一直蛮顺利,最近选扩总是弥散,不知道什么原因。
2楼2013-07-23 09:26:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyongliangx

铜虫 (小有名气)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-23 11:15:11
我之前也遇到过这样的问题。有点经验可以和你说说
一,关于弥散的问题,你首先要确定你的模板没有问题,可以跑个胶看一看大小,也可以做个测序。然后PCR时候做个阴性对照,排除是不是污染造成的。
二,你要找到模板和引物量的比例,可能是你模板量太多,也可能是引物太多。我比较推荐1ng/UL的模板浓度,引物可以用10uM和5uM都试试。
三,就是你操作的问题,要看你的是什么样的酶。反应体系最好按着说明书上做。注意一点说明书上note 内容:比如在冰上配体系,然后等到PCR仪进入到变性温度的时候再把PCR管放到PCR仪里。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2013-07-23 10:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hyc_charles

金虫 (小有名气)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 不卑微的我 at 2013-07-23 09:26:46
我现在也是碰到同样的问题。之前一直蛮顺利,最近选扩总是弥散,不知道什么原因。

加油加油,坚持顶住,我还真不信我做不出来了!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2013-07-23 12:47:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 材料与化工考研调剂 +4 孅華 2026-03-22 4/200 2026-03-23 16:13 by 一休哥FU
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +3 谷雨上岸 2026-03-23 4/200 2026-03-23 15:53 by ACS Nano——
[考研] 276求调剂。有半年电池和半年高分子实习经历 +8 材料学257求调剂 2026-03-23 9/450 2026-03-23 13:01 by ztnimte
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 3/150 2026-03-23 10:32 by Iveryant
[考研] 070300化学求调剂 +5 苑豆豆 2026-03-20 5/250 2026-03-23 09:39 by guoliang1816
[考研] 085600材料与化工 +10 安全上岸! 2026-03-16 10/500 2026-03-23 09:31 by Jy?
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-20 3/150 2026-03-22 16:00 by ColorlessPI
[考研] 303求调剂 +5 安忆灵 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:46 by 素颜倾城1988
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿南大,0703化学,分数336,求调剂 +3 收到VS 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:42 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 302求调剂 +12 呼呼呼。。。。 2026-03-17 12/600 2026-03-21 17:29 by ColorlessPI
[考研] 279求调剂 +5 红衣隐官 2026-03-21 5/250 2026-03-21 14:59 by lature00
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
信息提示
请填处理意见