| 查看: 2330 | 回复: 8 | |||
[交流]
关于PCR和PAGE胶
|
|
这段时间一直在做分子标记，被PCR整的够呛，卡在选扩这已经2个月了，产物总是时有时无，同样的材料重复一次，结果都会不一样或者什么都没有了，换了所有的试剂，换了新设计的引物，结果一样，真是快崩溃了。 另外就是PAGE胶，跑过的人都知道，这个也是很熬人的，做一次大半天就耗进去了，但扩增产物又只能用这个来检测，不然看不清楚，跑胶真是门艺术，中间的不可控步骤太多，这些都会造成你的结果不同。 有没有经验人士，遇到同样的问题，大家交流交流~ 祝大伙实验顺利！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有50人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- DNA非变性PAGE胶 回收条带 二次PCR出现问题 急！！！
已经有6人回复
- 急！PAGE胶回收后做二次PCR，目的条带变得很小！愁！
已经有6人回复
- 通过梯度PCR摸索的最佳退火温度，扩出来的条带不太亮，帮忙分析那些引物不可以用
已经有5人回复
- 关于丙烯酰胺凝胶电泳跑DNA样品的几个问题
已经有9人回复
- 挑单克隆后，菌液PCR检测所有条带都偏小，目的条带没有出现
已经有9人回复
- 4%PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）250bp处条带出现扭曲，求助！
已经有19人回复
- PCR不出带，求教
已经有14人回复
- pcr跑胶图
已经有6人回复
- PAGE跑PCR产物总是有问题~~
已经有9人回复
- 求助MSP凝胶电泳该如何选择
已经有16人回复
- 银染色聚丙烯酰胺凝胶电泳
已经有13人回复
- SDS-PAGE胶的问题
已经有9人回复
- pcr 带好宽啊!苦恼，求助ing!
已经有21人回复
- 微生物多样性研究的几个问题
已经有10人回复
- SSR-PCR求助
已经有21人回复
- 关于切胶回收后有质粒污染和拼接PCR涂抹装条带的问题，有点长，呵呵
已经有13人回复
- 如何从PAGE胶及尿素变性PAGE胶回收DNA样品
已经有7人回复
- DGGE上样孔很亮，DNA跑不下来
已经有12人回复
2楼2013-07-23 09:26:46
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-23 11:15:11
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-23 11:15:11
|
我之前也遇到过这样的问题。有点经验可以和你说说 一，关于弥散的问题，你首先要确定你的模板没有问题，可以跑个胶看一看大小，也可以做个测序。然后PCR时候做个阴性对照，排除是不是污染造成的。 二，你要找到模板和引物量的比例，可能是你模板量太多，也可能是引物太多。我比较推荐1ng/UL的模板浓度，引物可以用10uM和5uM都试试。 三，就是你操作的问题，要看你的是什么样的酶。反应体系最好按着说明书上做。注意一点说明书上note 内容：比如在冰上配体系，然后等到PCR仪进入到变性温度的时候再把PCR管放到PCR仪里。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
432898993楼2013-07-23 10:14:43
4楼2013-07-23 12:47:05
5楼2013-07-23 12:50:10
6楼2013-07-24 09:50:54
7楼2013-07-24 12:55:44
8楼2013-07-24 13:46:00
9楼2013-08-30 11:46:11
10