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夏天Western Blot 曝光总是白片
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请教各位WB高手 有没有遇到过夏天（外界气温较高）做WB 胶片曝光曝不出来的情况？ 我们实验室长期都在做WB 在天气冷的时候做WB一点问题没有 可是到了天热 WB总是大把大把白片情况出现 以下是我们采取的对策 1显影定影是刚换的 2 一抗为冰箱4度孵育过夜（12h） 3 二抗则是4摄氏度冰箱孵育 （怕牛奶HRP的二抗发酵坏掉 一般二抗孵育小于8h ） 3曝光前 还会把PBST洗好的膜（10min/次 共4次）放在冰箱4度1h左右 （尝试是不是因为膜的温度过高而影响ECL液的酶促反应） 4PS. 做胶的技术应该不会出现问题 跑胶正常 嗅酚蓝刚漂停止跑胶（marker清晰可见 水平 ） 转膜没有4度的条件 就用的预冷的trans buffer转膜 转膜后的PVDF膜上marker也清晰可见 膜与胶之间没有气泡 感觉该做的都做了 该小心的都小心了 可是曝光的时候总是大片白片出现 运气好的话可能会出现某一张膜有条带 其他膜白片 或者是荧光一下子就淬灭的情况 请教各位高手 不胜感激 [ Last edited by 杀生丸殿下_q on 2013-7-5 at 22:38 ] |
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daibingling
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