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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到酶蛋白上？
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Ayaolearn

木虫 (著名写手)

[求助] 请问His-tag（组氨酸标签）怎么加到酶蛋白上？

请问有什么方法可以把His-tag加到酶上面，不通过基因工程的方法，通过化学合成方法怎么做啊？前提是不能影响酶的活性！谢谢啊
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追求中...
1楼 2013-07-02 17:36:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-11 22:29:47
用很多真核表达载体都是带有His的，比如pcDNA3.1，将目的基因克隆到载体里的时候不要将终止密码子带进去，载体上His标签后面紧跟着就是终止密码子，这样表达出来的蛋白在3末端就会带有6个His，不会影响蛋白活性。
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6楼2013-07-09 17:05:47
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547star

木虫 (著名写手)
估计还是基因工程来得方便，你们没条件，可以考虑委托别的公司帮做，或者合作。
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为什么
13楼2013-07-11 17:16:06
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wangweida2

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-16 19:10:47
引用回帖:
10楼: Originally posted by Ayaolearn at 2013-07-10 22:37:17
由于我们课题组没有条件通过基因工程的方法合成，我们就想购买这种组氨酸标签酶，用于生物传感器的构建。请问一下，有公司能为我们提供所需要的这种组氨酸标签酶么？谢谢...

pcDNA3.1是invitrogen公司的，此外包括pcDNA4等好多载体都是带His的，具体信息包括其他载体信息invitrogen官网有提供。http://zh.invitrogen.com/search/global/searchAction.action?query=pcDNA3.1&resultsPerPage=15&show_seproductcategorynavigator=true&show_productcategorynavigator=true&show_taxonomynavigator=true&show_brandnavigator=true&show_sedocumenttypenavigator=true&mode=and&navigator=seproductcategorynavigator&modifier=DNA+Vectors
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14楼2013-07-11 18:35:44
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547star

木虫 (著名写手)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-16 19:11:30
引用回帖:
16楼: Originally posted by Ayaolearn at 2013-07-11 19:06:52
嗯，就是这么想的！那请问国内哪些生物公司做得比较好啊？上海生工怎么样啊？...

没有委托过，不过生工之类经营十多年的公司还是可靠一些，话费估计也比TaKaRa这样的外资公司少吧。这些公司代克隆一般没太大问题的，要优化表达估计难一些。如果你们连发酵纯化都不会，建议找专业生产蛋白（酶）的公司委托构建菌种、发酵和纯化全套的，直接拿到想要的蛋白，这样比较好。
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为什么
20楼2013-07-13 11:17:36
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普通回帖

Ayaolearn

木虫 (著名写手)
一个星期了，还是没人甩我，汗！
自己顶一个！！
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追求中...
2楼2013-07-09 13:36:10
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薛虹妮

银虫 (小有名气)
1949stone: 发挥你的智慧 想一个好办法 2013-07-09 15:11:33
额····化学合成····还要不失活····这不容易啊···
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3楼2013-07-09 13:57:08
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
帮你顶一次
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海纳百川止于至善
4楼2013-07-09 15:11:16
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一般都是将His-tag通过基因工程，突变基因最后的终止密码子将标签连上的，通过化学方法将标签连接到酶上，没听过
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5楼2013-07-09 15:17:57
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Ayaolearn

木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 薛虹妮 at 2013-07-09 13:57:08
额····化学合成····还要不失活····这不容易啊···

确实啊，这个是比较难！不过，昨天刚看了篇文献，上面提到了通过化学修饰，将His连接在辣根过氧化物酶（HRP）上，并且酶的活性还可以，但是文献没有提到化学修饰的细节。
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追求中...
7楼2013-07-10 22:27:31
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Ayaolearn

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 1949stone at 2013-07-09 15:11:16
帮你顶一次

谢谢！
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追求中...
8楼2013-07-10 22:27:54
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Ayaolearn

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 20083630zhan at 2013-07-09 15:17:57
一般都是将His-tag通过基因工程，突变基因最后的终止密码子将标签连上的，通过化学方法将标签连接到酶上，没听过

由于我们课题组没有条件通过基因工程的方法合成，我们就想购买这种组氨酸标签酶，用于生物传感器的构建。请问一下，有公司能为我们提供所需要的这种组氨酸标签酶么？谢谢
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9楼2013-07-10 22:36:19
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Ayaolearn

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wangweida2 at 2013-07-09 17:05:47
用很多真核表达载体都是带有His的，比如pcDNA3.1，将目的基因克隆到载体里的时候不要将终止密码子带进去，载体上His标签后面紧跟着就是终止密码子，这样表达出来的蛋白在3末端就会带有6个His，不会影响蛋白活性。

由于我们课题组没有条件通过基因工程的方法合成，我们就想购买这种组氨酸标签酶，用于生物传感器的构建。请问一下，有公司能为我们提供所需要的这种组氨酸标签酶么？谢谢
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10楼2013-07-10 22:37:17
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