| 查看: 3320 | 回复: 11 | ||
[求助]
急求！！！胰蛋白酶水解鱼精蛋白的方法！！！
|
||
| 本人做分子荧光探针，现为检测鱼精蛋白（protamine sulfate salt from salmom),需要水解鱼精蛋白，鱼精蛋白的主要成分（66%）为精氨酸，所以选择用胰蛋白酶水解。实验条件为PH=8.5，T=25°，溶剂为PBS（20mM),并添加了钙离子，可是总是不水解.....求助，怎样配胰蛋白酶溶液？国产胰蛋白酶好吗？为什么不水解呢？？？ |
回复此楼» 本帖已获得的红花（最新10朵）
雅鱼cc» 猜你喜欢
材料与化工371求调剂
已经有5人回复
-
328分调剂
已经有4人回复
-
295求调剂
已经有7人回复
-
081700，311，求调剂
已经有13人回复
-
283分求调剂
已经有6人回复
-
0854求调剂
已经有3人回复
-
332求调剂
已经有4人回复
-
284求调剂
已经有5人回复
-
304求调剂（085602，过四级，一志愿985）
已经有11人回复
-
0817化学工程与技术求调剂，一志愿中海洋319
已经有10人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 紧急求助:SDS-PAGE上样一定要调蛋白含量吗？
已经有9人回复
- 【紧急求助了】德国不锈钢号X7Cr13的几个问题，不胜感谢
已经有11人回复
- TPCK胰蛋白酶 酶切精氨酸和赖氨酸条件
已经有13人回复
- 胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，中性蛋白酶参与水解的话，是否3个小时左右就基本失活
已经有4人回复
- 角蛋白酶和碱性蛋白酶哪种对羽毛的水解效果更好
已经有8人回复
- α-酪蛋白和β-酪蛋白的区别 胰蛋白酶酶解后肽段差别大吗
已经有6人回复
- 腈水解成酰胺的反应条件
已经有12人回复
- 【求助/交流】Amrsco的大豆胰蛋白酶抑制剂（100mg，进口分装）的储存液和工作液怎么配
已经有5人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌表达系统蛋白酶对目的蛋白的水解问题
已经有11人回复
ottolzm
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2850.6
- 散金: 22
- 红花: 6
- 帖子: 551
- 在线: 311.4小时
- 虫号: 630297
- 注册: 2008-10-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2012-08-24 19:48:10
ottolzm
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 2850.6
- 散金: 22
- 红花: 6
- 帖子: 551
- 在线: 311.4小时
- 虫号: 630297
- 注册: 2008-10-19
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+10, 非常详细的回答，值得鼓励（5），另代楼主发金币（5） 2012-09-04 04:19:21
wizardfan: 金币+10, 非常详细的回答，值得鼓励（5），另代楼主发金币（5） 2012-09-04 04:19:21
|
呵呵 金币不金币的不要紧 关键在交流 正好做了点这方面的工作 给你说说 为什么钙离子可加可不加 囵吞的讲 钙离子是胰蛋白酶的激活剂 对于不同来源的胰蛋白酶的激活作用有所差异 从机理上讲 钙离子的加入会致使胰蛋白酶分子内部的盐离子键作用更加强烈，胰蛋白酶的两个β折叠形成的疏水孔结构域更加稳固 致使整体的Asp102,His57,Ser195,催化三联体和Asp189,Gly216,Gly226所形成的底物结合口袋结构更加稳固，二者相互协同的效率更加高效，从而使局部的酶催化效率提高，所以在相关的酶学性质试验中，总能得到，添加钙离子得到的酶活要稍高于不加钙离子的酶活，但是从我了解到你的实验和实验目的来看，这点并不会对你的实验产生影响，应为添加钙离子也不会造成多高的酶活的提高，而你的目的只是要求胰蛋白酶能降解你的蛋白质，至于活力的定量的高低，并没有多大作用，所以对此大可不必太多纠结，通过我用胰蛋白酶水解哺乳动物细胞的实验，这点可以得到很好地证明，加于不加钙离子，并没有本质上的区别，可能只是在时间上的差别，加了钙离子的催化的快一些，不加钙离子的催化的相对慢一些，实验发现这两者是前者5分钟完全水解好，后者可能需要延迟2-3分钟；不知道这样说是否能够解答你的疑惑。 |
4楼2012-09-03 23:04:21
3楼2012-09-03 20:30:33
5楼2012-09-05 23:53:55
6楼2012-10-12 17:00:44
7楼2012-12-14 06:10:03
jwt345532945
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 10.8
- 散金: 8
- 帖子: 56
- 在线: 31.8小时
- 虫号: 1036930
- 注册: 2010-06-06
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
8楼2014-05-09 13:18:21
赖穗0911
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 87.9
- 帖子: 176
- 在线: 40.7小时
- 虫号: 2869243
- 注册: 2013-12-13
- 性别: MM
- 专业: 生物医用高分子材料
9楼2015-03-28 09:04:45
赖穗0911
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 87.9
- 帖子: 176
- 在线: 40.7小时
- 虫号: 2869243
- 注册: 2013-12-13
- 性别: MM
- 专业: 生物医用高分子材料
10楼2015-03-28 09:06:14
