应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 急求！！！胰蛋白酶水解鱼精蛋白的方法！！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
121/2返回列表12下一页
查看: 3307  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

雅鱼cc

银虫 (小有名气)

[求助] 急求！！！胰蛋白酶水解鱼精蛋白的方法！！！

本人做分子荧光探针，现为检测鱼精蛋白（protamine sulfate salt from salmom),需要水解鱼精蛋白，鱼精蛋白的主要成分（66%）为精氨酸，所以选择用胰蛋白酶水解。实验条件为PH=8.5，T=25°，溶剂为PBS（20mM),并添加了钙离子，可是总是不水解.....求助，怎样配胰蛋白酶溶液？国产胰蛋白酶好吗？为什么不水解呢？？？
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

雅鱼cc

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
cherry
1楼 2012-08-23 11:22:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ottolzm

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+5, 回答充满了智慧，赞 2012-08-25 03:23:24
几个问题：
1.鱼精蛋白66%为精氨酸，虽然精氨酸是可以被胰蛋白酶特异性识别和降解的，但是这个只是相对的，并且作用在其羧基端，你是不是可以再分析分析鱼精蛋白的成分和特性；
2.动物来源的胰蛋白酶需要钙离子，也可以不需要，pH可以选择pH8.0即可，温度升高到37℃，将缓冲液换成20mMTris-HCL，并添加50mM Ca离子试试；
3.国产的胰酶品质不均一，可以选择进一步纯化过的，上海生工的胰蛋白酶粉末就不错，25g不到200RMB。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-08-24 19:48:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ottolzm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币+10, 非常详细的回答，值得鼓励（5），另代楼主发金币（5） 2012-09-04 04:19:21
引用回帖:
3楼: Originally posted by 雅鱼cc at 2012-09-03 20:30:33
谢谢您的指导，一直忙做实验，没有给你回复，那个金币怎样给您呢？我第一次发帖，不是很了解。请您z再指导下。Ps:胰蛋白酶为什么可以加钙离子也可以不加呢？我的导师问我，我回答不出来..........

呵呵 金币不金币的不要紧 关键在交流 正好做了点这方面的工作 给你说说 为什么钙离子可加可不加 囵吞的讲 钙离子是胰蛋白酶的激活剂 对于不同来源的胰蛋白酶的激活作用有所差异 从机理上讲 钙离子的加入会致使胰蛋白酶分子内部的盐离子键作用更加强烈，胰蛋白酶的两个β折叠形成的疏水孔结构域更加稳固 致使整体的Asp102,His57,Ser195,催化三联体和Asp189,Gly216,Gly226所形成的底物结合口袋结构更加稳固，二者相互协同的效率更加高效，从而使局部的酶催化效率提高，所以在相关的酶学性质试验中，总能得到，添加钙离子得到的酶活要稍高于不加钙离子的酶活，但是从我了解到你的实验和实验目的来看，这点并不会对你的实验产生影响，应为添加钙离子也不会造成多高的酶活的提高，而你的目的只是要求胰蛋白酶能降解你的蛋白质，至于活力的定量的高低，并没有多大作用，所以对此大可不必太多纠结，通过我用胰蛋白酶水解哺乳动物细胞的实验，这点可以得到很好地证明，加于不加钙离子，并没有本质上的区别，可能只是在时间上的差别，加了钙离子的催化的快一些，不加钙离子的催化的相对慢一些，实验发现这两者是前者5分钟完全水解好，后者可能需要延迟2-3分钟；不知道这样说是否能够解答你的疑惑。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-09-03 23:04:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

雅鱼cc

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
wizardfan: 金币-5, 代给金币 2012-09-04 04:19:54
引用回帖:
2楼: Originally posted by ottolzm at 2012-08-24 19:48:10
几个问题：
1.鱼精蛋白66%为精氨酸，虽然精氨酸是可以被胰蛋白酶特异性识别和降解的，但是这个只是相对的，并且作用在其羧基端，你是不是可以再分析分析鱼精蛋白的成分和特性；
2.动物来源的胰蛋白酶需要钙离子， ...

谢谢您的指导，一直忙做实验，没有给你回复，那个金币怎样给您呢？我第一次发帖，不是很了解。请您z再指导下。Ps:胰蛋白酶为什么可以加钙离子也可以不加呢？我的导师问我，我回答不出来.......
赞一下 回复此楼
cherry
3楼2012-09-03 20:30:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

雅鱼cc

银虫 (小有名气)
★
送鲜花一朵
wizardfan: 金币+1, 可以重开新帖求助 2012-09-06 05:55:15
谢谢您，那我就以送鲜花的方式给您金币吧。另外，您会用oringin作图吗？我最近在做紫外吸收的实验，因为想要得到酶水解蛋白过程所有使用模式是time scan,也就是固定一个波长，检测其在一个时间段的吸光度,做好后我不会用紫外作图.......，请问您会吗？
赞一下 回复此楼
cherry
5楼2012-09-05 23:53:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xlrain20

新虫 (初入文坛)
温度太低了，我用胰酶一般都是50℃
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-12 17:00:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

FIONA-SWH

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xlrain20 at 2012-10-12 17:00:44
温度太低了，我用胰酶一般都是50℃

求protamine sulfate structure，最近在写论文中有提到protamine sulfate，可是怎么都搜不到结构式啊，可以帮忙嘛？
赞一下 回复此楼
7楼2012-12-14 06:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jwt345532945

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by FIONA-SWH at 2012-12-14 06:10:03
求protamine sulfate structure，最近在写论文中有提到protamine sulfate，可是怎么都搜不到结构式啊，可以帮忙嘛？...

鱼精蛋白是混合物，不过你可以在ncbi搜索其单体的蛋白质一级序列。
赞一下 回复此楼
8楼2014-05-09 13:18:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赖穗0911

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ottolzm at 2012-08-24 19:48:10
几个问题：
1.鱼精蛋白66%为精氨酸，虽然精氨酸是可以被胰蛋白酶特异性识别和降解的，但是这个只是相对的，并且作用在其羧基端，你是不是可以再分析分析鱼精蛋白的成分和特性；
2.动物来源的胰蛋白酶需要钙离子， ...

您好，想请问您，如果我水解明胶，用木瓜蛋白酶，该怎样选择pH，温度，缓冲呢？
赞一下 回复此楼
求解答
9楼2015-03-28 09:04:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

赖穗0911

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 雅鱼cc at 2012-09-05 23:53:55
谢谢您，那我就以送鲜花的方式给您金币吧。另外，您会用oringin作图吗？我最近在做紫外吸收的实验，因为想要得到酶水解蛋白过程所有使用模式是time scan,也就是固定一个波长，检测其在一个时间段的吸光度,做好后我不 ...

您好，请问您现在还记得吗？我也遇到这方面的问题，想请教您
赞一下 回复此楼
求解答
10楼2015-03-28 09:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 雅鱼cc 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专硕 085600求调剂 +7 BBQ233 2026-03-30 7/350 2026-03-30 17:44 by oooqiao
[考研] 一志愿华东师范大学有机化学专业，初试351分，复试被刷求调剂! +6 真名有冰 2026-03-29 7/350 2026-03-30 16:36 by herarysara
[考研] 考研调剂 +5 Sanmu-124 2026-03-26 5/250 2026-03-30 13:36 by chemdavid
[考研] 求调剂 +7 青春裁为三截 2026-03-29 7/350 2026-03-30 13:14 by laoshidan
[考研] 材料工程专硕求调剂 +6 hyl3153942 2026-03-29 6/300 2026-03-30 12:04 by 1018329917
[考研] 085600材料与化工调剂 +6 kikiki7 2026-03-30 6/300 2026-03-30 10:57 by 星空星月
[考研] 318求调剂 +7 陈晨79 2026-03-30 7/350 2026-03-30 10:49 by 探123
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +7 倾____萧 2026-03-27 8/400 2026-03-30 09:37 by longlotian
[考研] 281求调剂 +4 亚克西good 2026-03-26 6/300 2026-03-29 21:06 by 啊李999
[考博] 26申博自荐 +6 whh869393 2026-03-24 6/300 2026-03-29 21:05 by nxgogo
[考研] 08工科求调剂286 +3 tgs_001 2026-03-28 3/150 2026-03-29 18:29 by 1018329917
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 317求调剂 +6 十闲wx 2026-03-24 6/300 2026-03-28 13:27 by Iveryant
[考研] 085600，材料与化工321分，求调剂 +9 大馋小子 2026-03-27 9/450 2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 一志愿郑大085600，310分求调剂 +5 李潇可 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 321求调剂 +6 wasdssaa 2026-03-26 6/300 2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭