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[求助]
急求！！！胰蛋白酶水解鱼精蛋白的方法！！！
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| 本人做分子荧光探针，现为检测鱼精蛋白（protamine sulfate salt from salmom),需要水解鱼精蛋白，鱼精蛋白的主要成分（66%）为精氨酸，所以选择用胰蛋白酶水解。实验条件为PH=8.5，T=25°，溶剂为PBS（20mM),并添加了钙离子，可是总是不水解.....求助，怎样配胰蛋白酶溶液？国产胰蛋白酶好吗？为什么不水解呢？？？ |
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ottolzm
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【答案】应助回帖
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wizardfan: 金币+10, 非常详细的回答，值得鼓励（5），另代楼主发金币（5） 2012-09-04 04:19:21
wizardfan: 金币+10, 非常详细的回答，值得鼓励（5），另代楼主发金币（5） 2012-09-04 04:19:21
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呵呵 金币不金币的不要紧 关键在交流 正好做了点这方面的工作 给你说说 为什么钙离子可加可不加 囵吞的讲 钙离子是胰蛋白酶的激活剂 对于不同来源的胰蛋白酶的激活作用有所差异 从机理上讲 钙离子的加入会致使胰蛋白酶分子内部的盐离子键作用更加强烈，胰蛋白酶的两个β折叠形成的疏水孔结构域更加稳固 致使整体的Asp102,His57,Ser195,催化三联体和Asp189,Gly216,Gly226所形成的底物结合口袋结构更加稳固，二者相互协同的效率更加高效，从而使局部的酶催化效率提高，所以在相关的酶学性质试验中，总能得到，添加钙离子得到的酶活要稍高于不加钙离子的酶活，但是从我了解到你的实验和实验目的来看，这点并不会对你的实验产生影响，应为添加钙离子也不会造成多高的酶活的提高，而你的目的只是要求胰蛋白酶能降解你的蛋白质，至于活力的定量的高低，并没有多大作用，所以对此大可不必太多纠结，通过我用胰蛋白酶水解哺乳动物细胞的实验，这点可以得到很好地证明，加于不加钙离子，并没有本质上的区别，可能只是在时间上的差别，加了钙离子的催化的快一些，不加钙离子的催化的相对慢一些，实验发现这两者是前者5分钟完全水解好，后者可能需要延迟2-3分钟；不知道这样说是否能够解答你的疑惑。 |
4楼2012-09-03 23:04:21
ottolzm
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