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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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doughtiness

新虫 (小有名气)

[交流] 酶切及构建载体问题 已有8人参与

大家好,请教大家个问题。以目的基因为模板,设计含有酶切位点(Kpnl and Xbal)的上、下游引物,进行PCR。将PCR产物克隆连接到PMD18-T,后来发现PMD18-T上同时也含有那两个酶切位点(Kpnl and Xbal),这样会影响将目的基因切下来的效率吗?我最终的目的是:要把目的基因插入到表达载体pPICZ中。
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doughtiness

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by kx444555 at 2013-07-01 10:47:41
看看两同样的酶切位点离点远不远,超过50BP的话跑胶还是可以看出来的,还有理论上酶切切完外面的酶切位点还会继续切里边的酶切位点的,酶适当多加一点

酶里面含有甘油,加多了会不会影响酶切效率啊!您建议的酶切体系是多少啊?
7楼2013-07-02 15:43:00
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-01 11:15:34
看看两同样的酶切位点离点远不远,超过50BP的话跑胶还是可以看出来的,还有理论上酶切切完外面的酶切位点还会继续切里边的酶切位点的,酶适当多加一点
星陈代谢
2楼2013-07-01 10:47:41
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chijing0225

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-07-02 02:38:34
影响不大,你可以适当延长酶切时间,构建好的载体要再送测序确定一下是不是只有你的目的条带
3楼2013-07-01 13:47:14
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-02 02:38:43
问题不大,保证酶切充分的话回收的目的片段不会带多余的序列。话说回来了,既然设计了酶切位点,为什么不直接连入表达载体呢。
4楼2013-07-02 00:46:31
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