应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 关于酶切表达载体的问题
81/1返回列表
查看: 1658  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

蛋白之家

新虫 (小有名气)

[求助] 关于酶切表达载体的问题

各位大侠：
    表达载体是4547碱基，其上的两个酶切位点之间相差40个碱基，本来是应该切掉这40个碱基，，可是每次切都有1000处有一条带  然后还有一个4000多的条带
载体是老板给的   图谱是从一篇文献上找的 根据图谱设计的酶切位点   能不能大家帮忙分析一下原因
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-14 21:48:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

woshizhufeng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
文献上的没切位点是不是不全啊，你在仔细找找其他的文章，看有没有其他的酶切位点。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-15 08:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sl35537417

木虫 (正式写手)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-15 15:31:34
1.载体本身不对  或者 图谱不对
2.酶有问题 或者酶切反应体系有问题 导致星号活性
3.有可能你得到的载体不是空载体  有可能连有别的片段
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-15 09:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sky_fly

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以根据质粒序列设计多个引物，进行测序，看看序列对不对，不过很多时候可能都是酶切时间太长造成的错切
赞一下 回复此楼
绝望越大，突破就越大
4楼2012-08-21 10:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangguoqing

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-08-21 16:21:07
个人建议：
1.确定你选择的酶切位点是单克隆位点；
2.双酶切的时候buffer要选择好，而且要知道酶有没有星活性；
3.确定载体是空载体。
赞一下 回复此楼
5楼2012-08-21 12:03:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by sky_fly at 2012-08-21 10:38:34
可以根据质粒序列设计多个引物，进行测序，看看序列对不对，不过很多时候可能都是酶切时间太长造成的错切

只切一个小时也是同样的效果么关键是
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-05 09:25:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励积极交流经验 2012-09-05 14:00:10
大阪市由于该载体资料不全，导致你对载体酶切位点分析有误造成的，你所用的酶切位点在载体上应该有两个，建议这样：
1 在谷歌上输入该载体的全名，后面一个空格输入sequence一般都能查到商品化载体序列，然后用DNAMAN或者BIOXM等分子生物学软件分析酶切位点，全面检查一下是否有重复的酶切位点。
2 考虑内切酶的污染和质量，如果你们实验室的内切酶是公用的，就要考虑是否别人在做双酶切的时候污染了其他内切酶，导致酶切条带有误，另外内切酶牌子的选择也是有讲究的，NEB的一般保真性和效率最好，性活性概率最低甚至没有，MBI和TAKARA的就要选择好BUFFER，否则时间长会有星活性，但是就你的实验来看，星活性概率不大，毕竟酶切时间很短。
一般你这种情况就是上述两种可能，一一排除吧。
赞一下 回复此楼
7楼2012-09-05 11:06:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

蛋白之家

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by huguangdong at 2012-09-05 11:06:28
大阪市由于该载体资料不全，导致你对载体酶切位点分析有误造成的，你所用的酶切位点在载体上应该有两个，建议这样：
1 在谷歌上输入该载体的全名，后面一个空格输入sequence一般都能查到商品化载体序列，然后用DNA ...

嗯  很感谢
回复此楼
8楼2012-09-05 16:22:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 蛋白之家 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 中科院材料273求调剂 +3 yzydy 2026-03-15 3/150 2026-03-15 21:15 by ms629
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-15 3/150 2026-03-15 09:12 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 复试调剂 +3 呼呼？~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 一志愿天大化工（085600）调剂总分338 +6 蔡大美女 2026-03-09 6/300 2026-03-14 02:46 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +5 鹤遨予卿 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:44 by JourneyLucky
[考研] 332分材料工程调剂 +3 莓好时光海苔 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:03 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 332求调剂 +3 zjy101327 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:48 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 【0856】化学工程（085602）313 分，本科学科评估A类院校化学工程与工艺，诚求调剂 +7 小刘快快上岸 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:06 by ruiyingmiao
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 0857 资源与环境 285分 +6 未名考生 2026-03-09 6/300 2026-03-11 21:08 by 30660438
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭