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关于酶切表达载体的问题
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各位大侠： 表达载体是4547碱基，其上的两个酶切位点之间相差40个碱基，本来是应该切掉这40个碱基，，可是每次切都有1000处有一条带 然后还有一个4000多的条带 载体是老板给的 图谱是从一篇文献上找的 根据图谱设计的酶切位点 能不能大家帮忙分析一下原因 |
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2楼2012-08-15 08:42:16
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励积极交流经验 2012-09-05 14:00:10
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大阪市由于该载体资料不全，导致你对载体酶切位点分析有误造成的，你所用的酶切位点在载体上应该有两个，建议这样： 1 在谷歌上输入该载体的全名，后面一个空格输入sequence一般都能查到商品化载体序列，然后用DNAMAN或者BIOXM等分子生物学软件分析酶切位点，全面检查一下是否有重复的酶切位点。 2 考虑内切酶的污染和质量，如果你们实验室的内切酶是公用的，就要考虑是否别人在做双酶切的时候污染了其他内切酶，导致酶切条带有误，另外内切酶牌子的选择也是有讲究的，NEB的一般保真性和效率最好，性活性概率最低甚至没有，MBI和TAKARA的就要选择好BUFFER，否则时间长会有星活性，但是就你的实验来看，星活性概率不大，毕竟酶切时间很短。 一般你这种情况就是上述两种可能，一一排除吧。 |
7楼2012-09-05 11:06:28
8楼2012-09-05 16:22:27