| 查看: 1479 | 回复: 7 | |||
[求助]
关于酶切表达载体的问题
|
|
各位大侠： 表达载体是4547碱基，其上的两个酶切位点之间相差40个碱基，本来是应该切掉这40个碱基，，可是每次切都有1000处有一条带 然后还有一个4000多的条带 载体是老板给的 图谱是从一篇文献上找的 根据图谱设计的酶切位点 能不能大家帮忙分析一下原因 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有68人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于EcoRI的部分酶切
已经有15人回复
- 构建pBI121表达载体，目的基因与载体连接不上
已经有54人回复
- 表达载体双酶切
已经有9人回复
- 求真菌表达载体pBARGPE1的酶切方法！！！
已经有11人回复
- 关于转化、菌落PCR
已经有8人回复
- 关于PCR引物设计及添加酶切位点和保护碱基的问题
已经有4人回复
- 关于SiRNA表达载体构建的问题
已经有9人回复
- 关于切胶回收后有质粒污染和拼接PCR涂抹装条带的问题，有点长，呵呵
已经有13人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 【求助/交流】连接实验假阳性加多如何解决
已经有20人回复
- 【求助/交流】在构建基因表达载体的时候什么时候需要人为地在上面加上启动子？
已经有6人回复
woshizhufeng
新虫 (小有名气)
- 应助: 34 (小学生)
- 金币: 8.4
- 红花: 1
- 帖子: 298
- 在线: 115.3小时
- 虫号: 1310932
- 注册: 2011-05-30
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
2楼2012-08-15 08:42:16
sl35537417
木虫 (正式写手)
- 应助: 36 (小学生)
- 金币: 1204.7
- 散金: 148
- 红花: 3
- 帖子: 396
- 在线: 225.1小时
- 虫号: 381094
- 注册: 2007-05-24
- 专业: 神经生物学
3楼2012-08-15 09:12:41
4楼2012-08-21 10:38:34
huangguoqing
木虫 (正式写手)
- 应助: 31 (小学生)
- 金币: 3524.6
- 散金: 100
- 红花: 3
- 帖子: 356
- 在线: 305.1小时
- 虫号: 909932
- 注册: 2009-11-22
- 性别: GG
- 专业: 基因组学
5楼2012-08-21 12:03:56
6楼2012-09-05 09:25:23
huguangdong
至尊木虫 (职业作家)
- MolEPI: 2
- 应助: 68 (初中生)
- 金币: 10532.4
- 散金: 858
- 红花: 102
- 帖子: 4271
- 在线: 1581.2小时
- 虫号: 1009663
- 注册: 2010-05-01
- 专业: 畜牧学
【答案】应助回帖
★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励积极交流经验 2012-09-05 14:00:10
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励积极交流经验 2012-09-05 14:00:10
|
大阪市由于该载体资料不全，导致你对载体酶切位点分析有误造成的，你所用的酶切位点在载体上应该有两个，建议这样： 1 在谷歌上输入该载体的全名，后面一个空格输入sequence一般都能查到商品化载体序列，然后用DNAMAN或者BIOXM等分子生物学软件分析酶切位点，全面检查一下是否有重复的酶切位点。 2 考虑内切酶的污染和质量，如果你们实验室的内切酶是公用的，就要考虑是否别人在做双酶切的时候污染了其他内切酶，导致酶切条带有误，另外内切酶牌子的选择也是有讲究的，NEB的一般保真性和效率最好，性活性概率最低甚至没有，MBI和TAKARA的就要选择好BUFFER，否则时间长会有星活性，但是就你的实验来看，星活性概率不大，毕竟酶切时间很短。 一般你这种情况就是上述两种可能，一一排除吧。 |
7楼2012-09-05 11:06:28
8楼2012-09-05 16:22:27