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蛋白之家

新虫 (小有名气)

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[求助] 关于酶切表达载体的问题

各位大侠：
表达载体是4547碱基，其上的两个酶切位点之间相差40个碱基，本来是应该切掉这40个碱基，，可是每次切都有1000处有一条带然后还有一个4000多的条带
载体是老板给的图谱是从一篇文献上找的根据图谱设计的酶切位点能不能大家帮忙分析一下原因

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1楼2012-08-14 21:48:12

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huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 应助指数+1, 鼓励积极交流经验 2012-09-05 14:00:10

大阪市由于该载体资料不全，导致你对载体酶切位点分析有误造成的，你所用的酶切位点在载体上应该有两个，建议这样：
1 在谷歌上输入该载体的全名，后面一个空格输入sequence一般都能查到商品化载体序列，然后用DNAMAN或者BIOXM等分子生物学软件分析酶切位点，全面检查一下是否有重复的酶切位点。
2 考虑内切酶的污染和质量，如果你们实验室的内切酶是公用的，就要考虑是否别人在做双酶切的时候污染了其他内切酶，导致酶切条带有误，另外内切酶牌子的选择也是有讲究的，NEB的一般保真性和效率最好，性活性概率最低甚至没有，MBI和TAKARA的就要选择好BUFFER，否则时间长会有星活性，但是就你的实验来看，星活性概率不大，毕竟酶切时间很短。
一般你这种情况就是上述两种可能，一一排除吧。