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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » western blot 的蛋白上样量
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xiaomch2011

新虫 (初入文坛)

[交流] western blot 的蛋白上样量 已有6人参与

我是新手，没做过western，看资料western的蛋白上样量是30-100微克,有这么多吗？？蛋白电泳考染也是1-2微克就可以了？？western听说会上少一点，这样搞到我糊涂了，究竟上多少微升的蛋白？？

[ Last edited by xiaomch2011 on 2013-6-26 at 11:59 ]
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1楼 2013-06-26 10:34:10
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gaojuan1985

新虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-26 14:26:11
50 ug?不能一概而论吧
还是要取决于样品，是细胞裂解液还是单一蛋白？单一蛋白的话几个微克就足够，如果是细胞裂解液的话可以上的多一些，10-20 ug
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3楼2013-06-26 12:47:37
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
一般上50ug左右的量
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2013-06-26 12:27:09
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xiaomch2011

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gaojuan1985 at 2013-06-26 12:47:37
50 ug?不能一概而论吧
还是要取决于样品，是细胞裂解液还是单一蛋白？单一蛋白的话几个微克就足够，如果是细胞裂解液的话可以上的多一些，10-20 ug

我的蛋白是单一蛋白，浓度0.62mg/ml,我跑电泳考染是上3ul，那么western也上3ul？？这样子会不会太多了？？
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4楼2013-06-26 13:08:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-26 14:26:22
引用回帖:
4楼: Originally posted by xiaomch2011 at 2013-06-26 13:08:01
我的蛋白是单一蛋白，浓度0.62mg/ml,我跑电泳考染是上3ul，那么western也上3ul？？这样子会不会太多了？？...

30-100μg蛋白是指未经纯化的总蛋白提取物的量。如果你用的是纯品，western的上样量可以很小。western的检出限比考染和银染都低，一般只要有ng级，甚至几十pg的蛋白就可以检测到。当然，这还要看你使用的抗体的效价如何。我觉得你可以把考染是上样量降低100-1000倍试试。
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5楼2013-06-26 14:15:28
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