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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白的斑点杂交能像WERTERN BLOT一样检验蛋白的抗原性吗
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chenzhenwei0

铜虫 (小有名气)

[求助] 蛋白的斑点杂交能像WERTERN BLOT一样检验蛋白的抗原性吗

我最近在做蛋白表达，一直做免疫印迹都没有显色反应，而我用的对照确有显色带。同时我用蛋白斑点杂交来操作，可见我的蛋白样品和对照的同样有显色斑点，为什么WESTERN BLOT确得不到这样的结果呢，我直接用蛋白的斑点杂交能说明问题不？会不会是我免疫印迹操作有问题，可能出在哪呢，很是苦恼，望高手来指导指导，谢谢了
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1楼 2012-05-16 12:28:10
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chenzhenwei0

铜虫 (小有名气)
怎么没有人回复呢？
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2楼2012-05-16 15:01:29
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风华正茂168

新虫 (初入文坛)
这个不懂
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3楼2012-05-17 08:53:39
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chenzhenwei0

铜虫 (小有名气)
没人解答啊 跪求高手出没 谢谢了
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4楼2012-05-17 10:32:39
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叶倾意

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
[1]DOT-BLOT 在很多地方跟WesternBlot是一样的，但区别在于后者更加精确，后者不仅看出表型结合也能看出目的蛋白分子量，而Dot很容易出现假阳性。我做细胞筛选的时候，也会用DOT& WB，做DOT定量，做WB定性，两者目的是不一样的。
[2]我不太明白什么叫做“对照有显色”，你是指你的阳性样品么？还是内参？
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自知者智 自胜者勇 自暴者弃 自强者成
5楼2012-05-18 22:55:02
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chenzhenwei0

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 叶倾意 at 2012-05-18 22:55:02:
DOT-BLOT 在很多地方跟WesternBlot是一样的，但区别在于后者更加精确，后者不仅看出表型结合也能看出目的蛋白分子量，而Dot很容易出现假阳性。我做细胞筛选的时候，也会用DOT& WB，做DOT定量，做WB定性，两者 ...

谢谢你的解答 我的对照是阳性样品 看来很可能是假阳性了啊
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6楼2012-05-19 15:57:36
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华农夏田

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by chenzhenwei0 at 2012-05-19 15:57:36
谢谢你的解答 我的对照是阳性样品 看来很可能是假阳性了啊...

请教前辈：点杂交蛋白上样量有限制么?大于20，小于1oo微克，可行吧?
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要科研也要生活
7楼2014-02-22 18:49:53
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