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欧阳-90

银虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质电泳条带异常

有一个蛋白大小30KD左右的蛋白纯化，过分子筛S200出现两个峰，而且在还原电泳时都有30KD大小的条带。怀疑峰1是二聚体或者多聚体，因此跑了非还原电泳作对照。但是电泳结果是在30KD一下出现了条带，而大分子量没有明显蛋白条带。
  所跑电泳图见附件。而且奇怪的是我的该蛋白跑出来条带很奇怪，呈三叶草状。
  小弟想问各位大神：1我的目的蛋白为什么跑出来会是三叶草状；2：不加DTT的峰2为什么会出现明显小于30KD条带，而又大于19KD的条带，而且峰1也有。
蛋白质电泳条带异常
电泳图.jpg
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1楼 2013-06-13 23:19:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
欧阳-90(myprayer代发): 金币+1, Send one rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-14 08:12:38
1949stone: 学习一下 2013-06-14 08:19:02
1. 可能是样品中盐浓度高离子强度大
2. 非还原性胶的中有些蛋白的迁移率不同属于正常现象现象。没有发现大的带说明你的蛋白不形成分子间二硫键。
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欧阳-90
2楼2013-06-14 01:14:56
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欧阳-90

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-14 01:14:56
1. 可能是样品中盐浓度高离子强度大
2. 非还原性胶的中有些蛋白的迁移率不同属于正常现象现象。没有发现大的带说明你的蛋白不形成分子间二硫键。

那如何解释我的分子筛出现的两个峰呢，而且峰1峰2跑胶条带还原胶很相似，而非还原胶电泳不同？
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3楼2013-06-14 21:50:33
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 欧阳-90 at 2013-06-14 21:50:33
那如何解释我的分子筛出现的两个峰呢，而且峰1峰2跑胶条带还原胶很相似，而非还原胶电泳不同？...

无论是还原胶还是非还原胶，样品是经过SDS变性的，所以除非有分子间二硫键，样品跑出来的是单体。分子筛有两个峰可能是由于部分蛋白靠分子间疏水作用形成多聚体。
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4楼2013-06-15 15:45:15
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