24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

陈正启

铁虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 267.5
帖子: 44
在线: 26.4小时
虫号: 1973146
注册: 2012-09-04
性别: GG
专业: 微生物资源与分类学

[求助] 测序序列为载体序列怎么办

最近做基因克隆，已经确定P出基因了，但是在做连接转化送去测序过程中出现了问题，在送测之前做了菌液PCR验证，是有条带的，但是测序的结果都是载体序列。我没有用蓝白班筛选，以前没有用蓝白班筛选也能做出来的。想请教各位，这可能是什么原因呢，为什么挑出的克隆里都是假阳性。

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

双向测序序列拼接不起来已经有8人回复
求助测序得到条带NCBI上没有同源序列已经有8人回复
系统发育树里，为何自己测序的序列都聚成一簇已经有6人回复
急！PCR产物测序找不到引物已经有17人回复
目的基因连接到克隆载体后提取质粒测序，序列有问题已经有11人回复
测序结果去除载体序列已经有3人回复
蓝白斑筛选没问题，挑白色克隆测序无目的基因序列已经有9人回复
在做系统发育树的时候，如何从genbank上选择下载同源序列呢已经有10人回复
PCR测序结果分析已经有8人回复
克隆提取质粒测序结果怎么跟大肠杆菌菌液测序结果序列比对差异很大啊？已经有4人回复
线粒体基因控制区CR含重复序列，为什么PCR产物直接测序不准，而要纯化或者克隆再测序已经有12人回复
DNA测序后为什么拼接已经有8人回复
已经克隆测序到了matK序列，如何界定？急切求助中，谢谢！已经有10人回复
测序得到的结果不对，不知道是比对错误，还是其他什么问题？？？已经有3人回复
同一个平板上挑的两个菌测序，序列差很多，大家帮我看看啊，有比对图！谢谢啦已经有18人回复
测序后的DNA序列与预测的有几个碱基不同，怎么办已经有18人回复
如何根据DNA测序来判断蛋白质的序列呢？已经有9人回复
求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？已经有24人回复
【求助/交流】我做了SSH，测序了400个。反转录序列与NCBI比对还用将其反向吗已经有3人回复
【求助/交流】测序时，为什么测序结果是与目的碱基序列反向互补的序列呢？已经有6人回复
【求助/交流】刚测序回来的序列，请帮忙分析一下！已经有7人回复
【求助/交流】为何测序结果出来的是大肠杆菌的序列啊? 已经有6人回复
【求助/交流】怎样在一段序列中查找可能的测序引物？已经有4人回复

1楼 2013-06-13 16:51:38

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

nobodykqq

银虫 (小有名气)

应助: 19 (小学生)
金币: 145.7
红花: 2
帖子: 74
在线: 42.8小时
虫号: 1052399
注册: 2010-07-05
性别: GG
专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+5, 鼓励发帖应助！ 2013-06-13 18:43:19

菌液PCR出现假阳性很正常，你可以同时做1个阳性对照（目的基因为模板）、1个阴性对照（水为模板），以确定是不是由于你的PCR试剂受到污染所致。其实一般菌P都是没什么问题的，你这个现象属于少见。一旦出现这种现象，建议你从头开始重做，一步一步仔细的完成，送测序前提取质粒后酶切鉴定，鉴定重组载体是否构建成功的双保险（菌P和双酶切），二者都成功那么你的载体也就准确无误的构建成功了。