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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因特异性引物反转录的问题~~~~~~~~~~~~!!!

我用基因特异性引物反转录,引物的TM值是65°C,我看反转录酶的说明书说反转录时用42°C啊,是不是温度太低了,要不要提高温度啊?!
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
暖暖暖(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-07 01:49:18
暖暖暖: 金币+4, 有帮助 2013-06-12 10:19:09
42°C是逆转录酶的适宜作用温度。Tm是65°C的引物在42°应该可以annealing的。我没有试过更高的温度,太高温度下逆转录酶会失活的。
2楼2013-06-07 00:42:10
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
反转录最重要的就是反转录酶有活性,你不可能改掉酶的最适温度啊,可能的话能不能重新设计一下引物
3楼2013-06-07 10:58:39
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