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暖暖暖

铁虫 (小有名气)

[求助] 基因特异性引物反转录的问题~~~~~~~~~~~~！！！

我用基因特异性引物反转录，引物的TM值是65°C，我看反转录酶的说明书说反转录时用42°C啊，是不是温度太低了，要不要提高温度啊？！
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Only the strong survive.
1楼 2013-06-06 19:34:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
暖暖暖(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-07 01:49:18
暖暖暖: 金币+4, ★有帮助 2013-06-12 10:19:09
42°C是逆转录酶的适宜作用温度。Tm是65°C的引物在42°应该可以annealing的。我没有试过更高的温度，太高温度下逆转录酶会失活的。
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2楼2013-06-07 00:42:10
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
反转录最重要的就是反转录酶有活性，你不可能改掉酶的最适温度啊，可能的话能不能重新设计一下引物
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3楼2013-06-07 10:58:39
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