应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
51/1返回列表
查看: 3510  |  回复: 17
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zcf1990

银虫 (初入文坛)

[求助] 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?

请教两个问题：我的蛋白是pEt系统的，带his标签，表达出来了在上清，也纯化出来了，目的蛋白浓度很高，但活性很差（当然表达条件我已经优化了：37度过夜），我就怀疑是不是表达出来的目的蛋白部分（应该是大部分，不是全部）失活了。我想请教的是，可能是哪些原因造成我的蛋白部分失活以及怎样改进呢？希望大家能帮我，谢谢！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-06-03 10:40:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zcf1990

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-04 13:41:55
你是怎么检测你的蛋白活性的啊？按理说不会出现这种情况 还有你的是什么蛋白啊 你要是用western检测的话 western做不出条带原因很多 不能说明你蛋白失活

对了，我做的是HPPD，来源是拟南芥的。
赞一下 回复此楼
10楼2013-06-04 17:21:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zcf1990: 金币+1, ★有帮助 2013-06-03 15:24:51
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 18:20:42
如果你的蛋白是真核生物来源的话，可能翻译后修饰或折叠对活性很重要，可以试试毕赤酵母或昆虫细胞等真核表达系统。
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-03 14:04:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zcf1990: 金币+1, ★有帮助 2013-06-03 15:25:07
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-06-03 18:20:54
我的也是pET系统，带His标签，是原核蛋白，表达时用的25℃，还有你的蛋白会不会因为表达时被其他酶催化分解呢？所以你要注意温度，表达时有些操作要在冰上进行
赞一下 回复此楼
believe yourself！
3楼2013-06-03 14:43:05
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zcf1990(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-05 11:45:13
你做的蛋白是否需要结合一定的辅助因子才有活性？
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-04 01:45:16
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭