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zcf1990

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 550.5
散金: 30
帖子: 24
在线: 8.2小时
虫号: 2114416
注册: 2012-11-08
专业: 生物化学

[求助] 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?

请教两个问题：我的蛋白是pEt系统的，带his标签，表达出来了在上清，也纯化出来了，目的蛋白浓度很高，但活性很差（当然表达条件我已经优化了：37度过夜），我就怀疑是不是表达出来的目的蛋白部分（应该是大部分，不是全部）失活了。我想请教的是，可能是哪些原因造成我的蛋白部分失活以及怎样改进呢？希望大家能帮我，谢谢！

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1楼2013-06-03 10:40:22

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yanfang2012

木虫 (著名写手)

应助: 47 (小学生)
金币: 2878.9
散金: 174
红花: 8
帖子: 1203
在线: 158.6小时
虫号: 1925616
注册: 2012-08-05
性别: MM
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zcf1990: 金币+1, ★有帮助 2013-06-03 15:25:07
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-06-03 18:20:54

我的也是pET系统，带His标签，是原核蛋白，表达时用的25℃，还有你的蛋白会不会因为表达时被其他酶催化分解呢？所以你要注意温度，表达时有些操作要在冰上进行

believe yourself！

3楼2013-06-03 14:43:05

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