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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » his重组蛋白挂不上镍柱子的原因
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jessica_nn

铜虫 (初入文坛)

[求助] his重组蛋白挂不上镍柱子的原因

构建好的带有HIS标签的载体，诱导表达目的蛋白，在纯化的时候发现，目的蛋白（上清，可溶表达）挂不上柱子，都在流穿液中，重新再生了柱子，结果还是挂上，缓冲液成分：1M Tris-HCl  pH7.9, 0,5M NaCl ,10%甘油 ，咪唑（0-500mM,按需要配置），高手们指导一下，可能是什么原因呢？会不会是HIS标签掉了，怎么检测HIS标签是否存在呢？下图是SDS-PAGE检测电泳：（第一条带是含200mM咪唑的除杂蛋白的洗脱液，第二条带是流穿液，第三条带是Marker,Marker右面点了5个纯化蛋白的样，可是一个条带都没有）
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1楼 2013-06-03 09:51:10
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wacx33

禁虫 (小有名气)
★
jessica_nn(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 18:19:09
本帖内容被屏蔽
3楼2013-06-03 15:47:14
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
jessica_nn(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 12:42:25
1M Tris-HCl   0,5M NaCl盐离子浓度是不是高了些？检测HIS可以western bloting，你对图片的描述不对，第4个才是maker啊。
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相信自己
2楼2013-06-03 10:11:20
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