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jessica_nn铜虫 (初入文坛)
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[求助]
his重组蛋白挂不上镍柱子的原因
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构建好的带有HIS标签的载体，诱导表达目的蛋白，在纯化的时候发现，目的蛋白（上清，可溶表达）挂不上柱子，都在流穿液中，重新再生了柱子，结果还是挂上，缓冲液成分：1M Tris-HCl pH7.9, 0,5M NaCl ,10%甘油 ，咪唑（0-500mM,按需要配置），高手们指导一下，可能是什么原因呢？会不会是HIS标签掉了，怎么检测HIS标签是否存在呢？下图是SDS-PAGE检测电泳：（第一条带是含200mM咪唑的除杂蛋白的洗脱液，第二条带是流穿液，第三条带是Marker,Marker右面点了5个纯化蛋白的样，可是一个条带都没有） |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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2楼2013-06-03 10:11:20
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jessica_nn(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 18:19:09
jessica_nn(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-03 18:19:09
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3楼2013-06-03 15:47:14