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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 阴离子交换柱穿透
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cuipibird

银虫 (小有名气)

[求助] 阴离子交换柱穿透

我的目标蛋白 pI=6.3~6.5   使用缓冲溶液 5mM pH=7.5 Tris-HCl  通过阴离子交换柱，但是蛋白一点也没有吸附上，全都冲下来了，曾经使用过20mM pH=8.0 Tris-HCl 做缓冲溶液，还是吸附不住，柱子是新换上的，不知道是什么问题造成的
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1楼 2012-06-30 09:35:57
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-30 21:58:27
cuipibird: 金币+20, ★★★★★最佳答案 2012-07-03 09:27:28
你的目标蛋白所处的溶液盐浓度是不是过高了，一般理论上电导大于5mS/cm的话，盐离子就会与目的蛋白竞争离子交换剂的带点基团，从而导致目的蛋白挂不上柱；还有一个可能的原因就是tris-HCl所使用的环境温度要稳定，它随环境温度的改变而改变，例如：4℃时缓冲液的pH＝8.4，则37℃时的pH＝7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃～4℃。
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cuipibird
爱拼才会赢
2楼2012-06-30 10:22:28
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-02 14:00:10
离子交换柱不傍柱最大的原因就是你上样的样品中盐浓度过高，实在不行就透析或者用除盐柱换成无盐的buffer，再上样试试
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cuipibird
3楼2012-07-02 09:06:01
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cuipibird

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by anyaxiong at 2012-06-30 10:22:28
你的目标蛋白所处的溶液盐浓度是不是过高了，一般理论上电导大于5mS/cm的话，盐离子就会与目的蛋白竞争离子交换剂的带点基团，从而导致目的蛋白挂不上柱；还有一个可能的原因就是tris-HCl所使用的环境温度要稳定，它 ...

谢谢高手!我试试看。
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4楼2012-07-03 09:25:20
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cuipibird

银虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-07-02 09:06:01
离子交换柱不傍柱最大的原因就是你上样的样品中盐浓度过高，实在不行就透析或者用除盐柱换成无盐的buffer，再上样试试

非常感谢您的指点。
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5楼2012-07-03 09:27:11
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dshlove

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by anyaxiong at 2012-06-30 10:22:28
你的目标蛋白所处的溶液盐浓度是不是过高了，一般理论上电导大于5mS/cm的话，盐离子就会与目的蛋白竞争离子交换剂的带点基团，从而导致目的蛋白挂不上柱；还有一个可能的原因就是tris-HCl所使用的环境温度要稳定，它 ...

我们的Tris-HCl都是15℃下配置的，但是使用都是在4℃情况下，也从没出过问题啊。
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6楼2012-07-03 11:18:03
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-07-03 11:18:03
我们的Tris-HCl都是15℃下配置的，但是使用都是在4℃情况下，也从没出过问题啊。...

能做出结果那最好了，只是我想说的是理论指导是一方面，误差（仪器误差和操作误差）也很重要，不能盲目的迷信理论，这样容易钻牛角。。。。。
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爱拼才会赢
7楼2012-07-03 16:02:34
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cuipibird

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by anyaxiong at 2012-07-03 16:02:34
能做出结果那最好了，只是我想说的是理论指导是一方面，误差（仪器误差和操作误差）也很重要，不能盲目的迷信理论，这样容易钻牛角。。。。。...

多谢指导！
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8楼2012-07-05 08:51:48
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