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阴离子交换柱穿透
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| 我的目标蛋白 pI=6.3~6.5 使用缓冲溶液 5mM pH=7.5 Tris-HCl 通过阴离子交换柱，但是蛋白一点也没有吸附上，全都冲下来了，曾经使用过20mM pH=8.0 Tris-HCl 做缓冲溶液，还是吸附不住，柱子是新换上的，不知道是什么问题造成的 |
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anyaxiong
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| 你的目标蛋白所处的溶液盐浓度是不是过高了，一般理论上电导大于5mS/cm的话，盐离子就会与目的蛋白竞争离子交换剂的带点基团，从而导致目的蛋白挂不上柱；还有一个可能的原因就是tris-HCl所使用的环境温度要稳定，它随环境温度的改变而改变，例如：4℃时缓冲液的pH＝8.4，则37℃时的pH＝7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃～4℃。 |
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cuipibird2楼2012-06-30 10:22:28
dshlove
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