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jessica_nn

铜虫 (初入文坛)

[求助] his重组蛋白挂不上镍柱子的原因

构建好的带有HIS标签的载体,诱导表达目的蛋白,在纯化的时候发现,目的蛋白(上清,可溶表达)挂不上柱子,都在流穿液中,重新再生了柱子,结果还是挂上,缓冲液成分:1M Tris-HCl  pH7.9, 0,5M NaCl ,10%甘油 ,咪唑(0-500mM,按需要配置),高手们指导一下,可能是什么原因呢?会不会是HIS标签掉了,怎么检测HIS标签是否存在呢?下图是SDS-PAGE检测电泳:(第一条带是含200mM咪唑的除杂蛋白的洗脱液,第二条带是流穿液,第三条带是Marker,Marker右面点了5个纯化蛋白的样,可是一个条带都没有)
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
jessica_nn(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-03 12:42:25
1M Tris-HCl   0,5M NaCl盐离子浓度是不是高了些?检测HIS可以western bloting,你对图片的描述不对,第4个才是maker啊。
相信自己
2楼2013-06-03 10:11:20
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wacx33

禁虫 (小有名气)


jessica_nn(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-03 18:19:09
本帖内容被屏蔽

3楼2013-06-03 15:47:14
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