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袁1231

金虫 (小有名气)

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[求助] 求助western blot问题

大家能帮我看下，这个是什么问题吗？western 新手。
前两张图，一张是SDS-PAGE 胶染色后，一张是转膜后western. 什么都看不出来。后两个都是western，背景很强，大家觉得我改怎么做？已经是用10%的牛奶block了，难道我要换BSA试试？还是我一抗二抗的浓度加高了？谢谢大家。

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1楼 2013-06-02 06:26:54

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cicelyzh

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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
袁1231: 金币+2 2013-06-05 10:59:19

引用回帖:

8楼: Originally posted by 袁1231 at 2013-06-04 06:52:22
谢谢，你如果转膜对于大蛋白和小蛋白，你都用什么条件呢？别人告诉我350 mA 1hr, 可是不同蛋白大小是不是不一样啊？我一个150k, 一个16 k。按这个条件，我发现ladder 都在的，但是今天发现我16k的那张膜上除了lad ...

转膜和电泳的原理差不多，大蛋白跑得慢，小蛋白跑得快，所以转小蛋白所用的时间少一些，也可以适当降低电流。转膜的情况可以把胶染一下看看有没有残留。染膜当然也可以的，但染膜的反差比胶要差。如果用丽春红这样的染料，灵敏度不高，所以有时候看不到。我转NC膜用的条件与PVDF的一样，只是膜的性质不同，NC膜是亲水的，而且比较脆，操作的时候要小心一点。