24小时热门版块排行榜    

查看: 970  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

周志惠

新虫 (小有名气)

[求助] 质粒构建问题

最近在做一个基因的表达构建,采用实验室师兄连有外源片段的质粒,双酶切作载体,从大肠基因组上通过PCR拿到的片段进行双酶切,然后T4连接,挑出来的转化子居然是师兄连有外源片段的质粒,这是什么情况?是没有酶切完全吗?可是对载体进行切胶回收的时候,跑了2个半小时,应该分得很开了
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qqxs

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
周志惠(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-23 22:16:25
gyesang: 回帖置顶 2013-05-23 22:16:28
肯定胶回收的时候还是带着没切开的质粒了,质粒转化效率比连接产物高太多,所以有一点点污染,拿到的转化子也大都是质粒的。不知道你师兄的外源片段是多大的,建议再说双酶切是质粒切得少一点,浓度太高切不彻底和跑胶分不开的问题。你也应该再多几个转化子检测一下。
5楼2013-05-21 12:33:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
周志惠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-23 22:15:35
有可能是没有切开,不知道你挑的转化子是否都是假阳性?不过建议楼主连接后跑胶看看连接后质粒的大小和浓度。
2楼2013-05-21 10:12:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
周志惠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-23 22:15:42
应该是没切开,假阳性的问题,你挑转化子可以多挑几个试试
3楼2013-05-21 10:46:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youngker918

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
周志惠: 金币+5, 有帮助, 切两个半小时,还没有够吗 2013-05-21 10:52:47
周志惠(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-23 22:15:52
应该是没有切开啊,建议你在切胶回收前做下电泳验证下
天才就怕不够天才,坏又不够坏,天天都想离开,却不知何处才能换骨脱胎
4楼2013-05-21 10:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[基金申请] 面上意见出来了 +9 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 18/900 2026-08-30 16:47 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜? 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构,以效率低为荣,以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
请填处理意见