应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pEGFP重组载体转染细胞不发光，空载体发光，这是啥原因啊，急
131/2返回列表12下一页
查看: 3017  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

www.712100

新虫 (初入文坛)

[求助] pEGFP重组载体转染细胞不发光，空载体发光，这是啥原因啊，急 已有1人参与

如题，空质粒转染细胞后4小时就能看到部分细胞荧光，但是重组质粒一点都没有，转然后八小时在看还是这样。请教大家这是什么原因呢？我用的是N1，目的片段长度两千多。还有一个多月就该走了，没想到又遇到这个问题，求救啊，各位
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-07-29 11:45:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

huguangdong

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-30 13:38:13
重组之力移码突变的可能性很大，建议自己好好比对一下，移码突变之后GFP肯定不发光，另外观察荧光都是24H后，如果确定质粒没问题，就24小时后再看，你也太着急了吧。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-07-29 18:56:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

somer2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖帮助解答问题。 2012-07-29 18:18:12
建议你耐心等一等，好歹给人家24小时以完成从DNA到蛋白质的过程。
等待的同时可以考虑：1、转染效率问题
                    2、目的蛋白的稳定性问题（容易降解的蛋白要把蛋白"半衰期"（half life）考察一下）
                    3、质粒构建问题（测序结果是否认真比对了等）
但愿有帮助。
赞一下 回复此楼
2楼2012-07-29 12:31:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-07-29 20:51:38
你确认电转染成功没有，GFP的荧光效果不错应该不会有问题，

你大概有多少colony。
赞一下 回复此楼
3楼2012-07-29 15:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

churchill87426

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、至少表达24hr吧，一般48-72
2、读码框移位了？
赞一下 回复此楼
5楼2012-07-29 21:49:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

www.712100

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by somer2012 at 2012-07-29 12:31:24
建议你耐心等一等，好歹给人家24小时以完成从DNA到蛋白质的过程。
等待的同时可以考虑：1、转染效率问题
                    2、目的蛋白的稳定性问题（容易降解的蛋白要把蛋白"半衰期"（half life）考 ...

质粒是公司合成的，我也测序看了，只有一个点突变，其余都正确。我现在转染48小时后，12孔板细胞中能有10个左右带微弱荧光的细胞，但是大部分是变圆脱落的死细胞。很难挑单克隆，是不是转染效率的问题啊？不知道有什么办法能提高转染效率么？这次真是毕其功于一役了，╮(╯▽╰)╭
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-02 23:05:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

www.712100

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fjtony163 at 2012-07-29 15:20:57
你确认电转染成功没有，GFP的荧光效果不错应该不会有问题，

你大概有多少colony。

我现在转染48小时后，12孔板细胞中能有10个左右带微弱荧光的细胞，但是大部分是变圆脱落的死细胞，很难挑单克隆。我初步考虑是转染效率太低了，不知道有什么办法能提高转染效率么？
赞一下 回复此楼
7楼2012-08-02 23:07:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

www.712100

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huguangdong at 2012-07-29 18:56:09
重组之力移码突变的可能性很大，建议自己好好比对一下，移码突变之后GFP肯定不发光，另外观察荧光都是24H后，如果确定质粒没问题，就24小时后再看，你也太着急了吧。

质粒是公司合成的，我也测序看了，只有一个点突变，其余都正确。我现在转染48小时后，12孔板细胞中能有10个左右带微弱荧光的细胞，但是大部分是变圆脱落的死细胞。很难挑单克隆，是不是转染效率的问题啊？不知道有什么办法能提高转染效率么？
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-02 23:11:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

www.712100

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by somer2012 at 2012-07-29 12:31:24
建议你耐心等一等，好歹给人家24小时以完成从DNA到蛋白质的过程。
等待的同时可以考虑：1、转染效率问题
                    2、目的蛋白的稳定性问题（容易降解的蛋白要把蛋白"半衰期"（half life）考 ...

有没有荧光是不是应该看GFP蛋白的半衰期啊？这样的话空载体能看到荧光应该就没有问题吧？
赞一下 回复此楼
9楼2012-08-02 23:13:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

www.712100

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by churchill87426 at 2012-07-29 21:49:25
1、至少表达24hr吧，一般48-72
2、读码框移位了？

现在发现还是有极少数的带荧光的细胞，但是大部分是死细胞，⊙﹏⊙b汗，很难挑克隆。
赞一下 回复此楼
10楼2012-08-02 23:14:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 www.712100 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:00 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:33 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:49 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:25 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
[基金申请] 面上有专家说实验设备不是我们单位的 +6 zj_muchong 2026-09-08 8/400 2026-09-11 06:56 by suifengdao
[有机交流] 科研求助 10+4 我吃一只鱼 2026-09-07 4/200 2026-09-10 08:32 by 0940628
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭