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20083630zhan

木虫 (正式写手)

[交流] 连接转化交流贴

大家把自己连接转化遇到的困难以及经验写下来吧，
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1楼 2013-05-15 22:09:17
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20083630zhan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 莓林塔 at 2013-05-19 14:43:11
TA连接的体系本身就是高离子浓度的，不适宜用电转啊，电转转个质粒啥的还是不错的。。而且我昨天也电转了，还是没长！！！好讨厌啊，还没找到原因。。。...

我用的载体是PUC19，感觉电转化效率比化学方法好，但是，最近挑单菌落PCR偶条带，提取质粒酶切总是没有条带，好桑心啊
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13楼2013-05-20 11:17:46
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
20083630zhan(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-16 08:24:00
这几天做质粒转化，一直没长出菌来，我想想估计是质粒酶切跑电泳切胶回收浓度太低了，都没有多少质粒转进去，而且感受态细胞浓度也不够高。总之都是浓度低惹的祸
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2楼2013-05-15 22:17:56
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yiloutingyu

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
20083630zhan(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-16 08:24:08
已经做了一个月了，还是没做出来，一直涂板长不出来，后来找到原因，是大肠杆菌的原因，换了 做场感受态之后，能长出来，挑单菌落后摇不起来。就这样耗着，前面都没问题，我也各种验证，现在在怀疑我的感受态试剂盒。连接以前是在16度 水浴过夜，现在换成4度冰箱里冰浴过夜，效果好一些。在转化的过程中，最好是42度 热击90秒。
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4楼2013-05-15 23:22:07
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光树林

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
20083630zhan(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-19 18:16:31
回收浓度确实有一定的影响，主要是最好16度多连接一会儿，过夜挺好的
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5楼2013-05-16 00:00:05
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