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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做完连接转化居然掉下一段基因...？求答案
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gundamba

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做完连接转化居然掉下一段基因...？求答案 已有10人参与

做连接，转化大肠，本来是6000的载体加1000多的片段，粗提质粒电泳图除了少量自连以外，其余都往下掉到了2000多的条带处。以前没有过这种情况，载体基础质粒是PUC19，做过很多次了，同实验室的人也发生了这种情况，没有连上反而掉了一大截（并不是转化时剪切作用掉下的那么一点，是很大一块），有哪位朋友能给个解释啊，着急死了！
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1楼 2010-11-11 10:10:32
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用质粒电泳检测时，用什么marker判断质粒大小呢，和什么比掉了2000多呢！
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2楼2010-11-11 10:53:41
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2010-11-11 10:53:41:
用质粒电泳检测时，用什么marker判断质粒大小呢，和什么比掉了2000多呢！

我用1kb的MAKER做的对照，跟原质粒做对比
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3楼2010-11-11 13:11:26
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★
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看天(金币+2):鼓励交流 2010-11-11 17:40:08
是不是连接buffer污染了酶，质粒在连接过程中发生了意外酶切，很有可能的，查查看吧。
质粒肯定不会无缘无故变小的。
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青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2010-11-11 16:08:46
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2010-11-11 16:08:46:
是不是连接buffer污染了酶，质粒在连接过程中发生了意外酶切，很有可能的，查查看吧。
质粒肯定不会无缘无故变小的。

非常感谢你的参与，我一开始也是这么想的，但是同实验室的同学也出现了这个问题，而大家用的酶都是独立的，所以不太可能是这种情况。
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5楼2010-11-11 20:06:20
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空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问你使用的普通的PCR Mark还是跑质粒的专用Mark？
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a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2010-11-12 10:27:46
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xiangshengyan

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用相同的条件再做一次 要是出现同样的结果 再进行研究
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ANNA&KEVIN
7楼2010-11-12 10:52:23
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是否是因为连接上了之后成环状了，然后Mark是检验线性片段大小的，所以环和线跑的速度不一样，所以才显示的位置不对应呢？
我猜的，不知道对不对
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8楼2010-11-12 12:39:37
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amilie030312

金虫 (正式写手)
切一刀再跑跑看呢？
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9楼2010-11-12 12:40:08
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zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-11-12 12:39:37:
是否是因为连接上了之后成环状了，然后Mark是检验线性片段大小的，所以环和线跑的速度不一样，所以才显示的位置不对应呢？
我猜的，不知道对不对

我觉得也是这样吧，你的酶切前的载体质粒和连接后的质粒是一起跑的胶吗？
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10楼2010-11-12 14:18:51
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