应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做完连接转化居然掉下一段基因...？求答案
181/2返回列表12下一页
查看: 1901  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

gundamba

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做完连接转化居然掉下一段基因...？求答案 已有10人参与

做连接，转化大肠，本来是6000的载体加1000多的片段，粗提质粒电泳图除了少量自连以外，其余都往下掉到了2000多的条带处。以前没有过这种情况，载体基础质粒是PUC19，做过很多次了，同实验室的人也发生了这种情况，没有连上反而掉了一大截（并不是转化时剪切作用掉下的那么一点，是很大一块），有哪位朋友能给个解释啊，着急死了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-11 10:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用质粒电泳检测时，用什么marker判断质粒大小呢，和什么比掉了2000多呢！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-11 10:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2010-11-11 10:53:41:
用质粒电泳检测时，用什么marker判断质粒大小呢，和什么比掉了2000多呢！

我用1kb的MAKER做的对照，跟原质粒做对比
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-11 13:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):鼓励交流 2010-11-11 17:40:08
是不是连接buffer污染了酶，质粒在连接过程中发生了意外酶切，很有可能的，查查看吧。
质粒肯定不会无缘无故变小的。
赞一下(2人) 回复此楼
青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2010-11-11 16:08:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2010-11-11 16:08:46:
是不是连接buffer污染了酶，质粒在连接过程中发生了意外酶切，很有可能的，查查看吧。
质粒肯定不会无缘无故变小的。

非常感谢你的参与，我一开始也是这么想的，但是同实验室的同学也出现了这个问题，而大家用的酶都是独立的，所以不太可能是这种情况。
赞一下 回复此楼
5楼2010-11-11 20:06:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
请问你使用的普通的PCR Mark还是跑质粒的专用Mark？
赞一下(1人) 回复此楼
a?,c??ae~?a,EURc§?c?μé-,cs,,a‘?é?“i1/4?i1/4?i1/4?i1/4?
6楼2010-11-12 10:27:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiangshengyan

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用相同的条件再做一次 要是出现同样的结果 再进行研究
赞一下(1人) 回复此楼
ANNA&KEVIN
7楼2010-11-12 10:52:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
是否是因为连接上了之后成环状了，然后Mark是检验线性片段大小的，所以环和线跑的速度不一样，所以才显示的位置不对应呢？
我猜的，不知道对不对
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-11-12 12:39:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

amilie030312

金虫 (正式写手)
切一刀再跑跑看呢？
赞一下 回复此楼
9楼2010-11-12 12:40:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-11-12 12:39:37:
是否是因为连接上了之后成环状了，然后Mark是检验线性片段大小的，所以环和线跑的速度不一样，所以才显示的位置不对应呢？
我猜的，不知道对不对

我觉得也是这样吧，你的酶切前的载体质粒和连接后的质粒是一起跑的胶吗？
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-11-12 14:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gundamba 的主题更新
181/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:52 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 6/300 2026-08-23 00:40 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 8/400 2026-08-22 23:51 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 10/500 2026-08-22 23:42 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +11 羊腰板 2026-08-21 11/550 2026-08-22 22:03 by lsbin3733
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 3/150 2026-08-22 22:03 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +3 zjuhero 2026-08-22 4/200 2026-08-22 20:02 by mycsru
[基金申请] 人气不行了 +8 fansofjerry 2026-08-21 8/400 2026-08-22 16:30 by zyqchem
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 14/700 2026-08-21 23:51 by cratir
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 科研孤儿太难了 +17 我4大白菜 2026-08-20 18/900 2026-08-21 20:57 by zhangev
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 我面上完蛋了 +7 且听虎啸 2026-08-20 8/400 2026-08-21 12:31 by 酷酷墨镜
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭