应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做完连接转化居然掉下一段基因...？求答案
51/1返回列表
查看: 1957  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

gundamba

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】做完连接转化居然掉下一段基因...？求答案 已有10人参与

做连接，转化大肠，本来是6000的载体加1000多的片段，粗提质粒电泳图除了少量自连以外，其余都往下掉到了2000多的条带处。以前没有过这种情况，载体基础质粒是PUC19，做过很多次了，同实验室的人也发生了这种情况，没有连上反而掉了一大截（并不是转化时剪切作用掉下的那么一点，是很大一块），有哪位朋友能给个解释啊，着急死了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-11-11 10:10:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by amilie030312 at 2010-11-12 12:39:37:
是否是因为连接上了之后成环状了，然后Mark是检验线性片段大小的，所以环和线跑的速度不一样，所以才显示的位置不对应呢？
我猜的，不知道对不对

我觉得也是这样吧，你的酶切前的载体质粒和连接后的质粒是一起跑的胶吗？
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-11-12 14:18:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

zgb1982

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用质粒电泳检测时，用什么marker判断质粒大小呢，和什么比掉了2000多呢！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-11-11 10:53:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2010-11-11 10:53:41:
用质粒电泳检测时，用什么marker判断质粒大小呢，和什么比掉了2000多呢！

我用1kb的MAKER做的对照，跟原质粒做对比
赞一下 回复此楼
3楼2010-11-11 13:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)

大洪
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+2):鼓励交流 2010-11-11 17:40:08
是不是连接buffer污染了酶，质粒在连接过程中发生了意外酶切，很有可能的，查查看吧。
质粒肯定不会无缘无故变小的。
赞一下(2人) 回复此楼
青春的岁月，我们身不由己，只因这胸中燃烧的梦想！
4楼2010-11-11 16:08:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭