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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】做完连接转化居然掉下一段基因...？求答案
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gaolef4s

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-03 11:42:20
这种情况很可能是重组引起的！
比对一下载体和目的基因是否具有同源区域，看看有没有相关的报道称你的目的基因对大肠杆菌有毒性。
建议：换一种载体菌株
对毒性的耐受，一般DH5a要优于TOP10，如果还是不行，可以试试英韦创津的STBL系列菌株！
欢迎交流，祝实验顺利！
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这一切都会过去！
11楼2010-11-12 16:41:29
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):正解 2010-12-03 11:42:41
最好用载体跟插入片断上有的酶切一下，看一下酶切片断大小是否对。
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hehe
12楼2010-11-12 17:11:15
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lvbobo823 at 2010-11-12 17:11:15:
最好用载体跟插入片断上有的酶切一下，看一下酶切片断大小是否对。

做连接以前都跑过电泳了，没问题，确实是我要连接的东西，现在掉完以后剩下的大小比我的基础质粒还小...
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13楼2010-11-12 19:49:40
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gundamba at 2010-11-11 20:06:20:

非常感谢你的参与，我一开始也是这么想的，但是同实验室的同学也出现了这个问题，而大家用的酶都是独立的，所以不太可能是这种情况。

就是1KBP的maker，我做大批量的，结果虽然还是大部分往下掉，但是筛出了两株没掉的我要的质粒了....奇怪了
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14楼2010-12-03 11:27:58
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xiangshengyan at 2010-11-12 10:52:23:
用相同的条件再做一次 要是出现同样的结果 再进行研究

不是的，因为掉的太大了，后来重复试验做出来了，但是掉的情况还是很普遍，呵呵，谢谢！
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15楼2010-12-03 11:28:56
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beisimai895

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主你是拿连完后的质粒作电泳的吗，如果是这样的话，你的实验本来就存在误区，因为质粒的结构比较特殊，所以不能通过电泳来观察大小，一般都是酶切之后电泳来检测大小的，这个内容你上网查一下就知道了，而且你们整个实验室的人都这样操作吗？不可思议。
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16楼2010-12-03 11:44:22
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
总得切了之后再看大小，或者做双酶切再看大小，那样比较准确
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一直向前！
17楼2010-12-03 13:17:46
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gundamba

木虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2010-12-03 11:44:22:
楼主你是拿连完后的质粒作电泳的吗，如果是这样的话，你的实验本来就存在误区，因为质粒的结构比较特殊，所以不能通过电泳来观察大小，一般都是酶切之后电泳来检测大小的，这个内容你上网查一下就知道了，而且你们 ...

这个我当然懂了，我们跑的时候把原质粒也带上了，如果连接成功应该比原质粒大，首先确定这个以后再精提质粒酶切验证大小。我们实验室没这么弱！谢谢！
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18楼2010-12-07 17:08:59
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