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gaolef4s

金虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-12-03 11:42:20
这种情况很可能是重组引起的!
比对一下载体和目的基因是否具有同源区域,看看有没有相关的报道称你的目的基因对大肠杆菌有毒性。
建议:换一种载体菌株
对毒性的耐受,一般DH5a要优于TOP10,如果还是不行,可以试试英韦创津的STBL系列菌株!
欢迎交流,祝实验顺利!
这一切都会过去!
11楼2010-11-12 16:41:29
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
silicare(金币+1):正解 2010-12-03 11:42:41
最好用载体跟插入片断上有的酶切一下,看一下酶切片断大小是否对。
hehe
12楼2010-11-12 17:11:15
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gundamba

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by lvbobo823 at 2010-11-12 17:11:15:
最好用载体跟插入片断上有的酶切一下,看一下酶切片断大小是否对。

做连接以前都跑过电泳了,没问题,确实是我要连接的东西,现在掉完以后剩下的大小比我的基础质粒还小...
13楼2010-11-12 19:49:40
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gundamba

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by gundamba at 2010-11-11 20:06:20:

非常感谢你的参与,我一开始也是这么想的,但是同实验室的同学也出现了这个问题,而大家用的酶都是独立的,所以不太可能是这种情况。

就是1KBP的maker,我做大批量的,结果虽然还是大部分往下掉,但是筛出了两株没掉的我要的质粒了....奇怪了
14楼2010-12-03 11:27:58
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gundamba

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by xiangshengyan at 2010-11-12 10:52:23:
用相同的条件再做一次 要是出现同样的结果 再进行研究

不是的,因为掉的太大了,后来重复试验做出来了,但是掉的情况还是很普遍,呵呵,谢谢!
15楼2010-12-03 11:28:56
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beisimai895

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
楼主你是拿连完后的质粒作电泳的吗,如果是这样的话,你的实验本来就存在误区,因为质粒的结构比较特殊,所以不能通过电泳来观察大小,一般都是酶切之后电泳来检测大小的,这个内容你上网查一下就知道了,而且你们整个实验室的人都这样操作吗?不可思议。
16楼2010-12-03 11:44:22
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
总得切了之后再看大小,或者做双酶切再看大小,那样比较准确
一直向前!
17楼2010-12-03 13:17:46
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gundamba

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by beisimai895 at 2010-12-03 11:44:22:
楼主你是拿连完后的质粒作电泳的吗,如果是这样的话,你的实验本来就存在误区,因为质粒的结构比较特殊,所以不能通过电泳来观察大小,一般都是酶切之后电泳来检测大小的,这个内容你上网查一下就知道了,而且你们 ...

这个我当然懂了,我们跑的时候把原质粒也带上了,如果连接成功应该比原质粒大,首先确定这个以后再精提质粒酶切验证大小。我们实验室没这么弱!谢谢!
18楼2010-12-07 17:08:59
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