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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 转基因 » 转基因烟草DNA可以检测到目的条带，RNA反转录的CDNA进行检测不到目的条带
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zhangxujia

新虫 (初入文坛)

[求助] 转基因烟草DNA可以检测到目的条带，RNA反转录的CDNA进行检测不到目的条带

通过DNA目的条带检测，共得到18株转基因烟草。提取了RNA进行逆转录的进行目的条带的检测，却一株也检测不到。CDNA进行GUS、HYG的验证PCR却是条带有的。已知RNA提取成功，ACTION是有有的。如果说基因没有转进去，那么DNA的目的条带的检测是不可能检测得到，说明是转进去了。会不会是嵌合体，如果是嵌合体那18株一个都没有，这个正常么？求教，各位大侠啊  
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1楼 2013-05-10 10:54:02
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
35S产生的RNA, 就算序列很特殊很短命应该不会马上被讲解得PCR都做不出来吧.
再查查你做出的载体序列, 35S还在?
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4楼2013-05-12 00:35:46
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看下载体构建有没有问题？
也有可能是转进去了却不表达，所以能检测到DNA却没有逆转录
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你的日子如何，你的力量也必如何！
2楼2013-05-10 14:35:35
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zhangxujia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2013-05-10 14:35:35
看下载体构建有没有问题？
也有可能是转进去了却不表达，所以能检测到DNA却没有逆转录

载体构建是用的pCAMBIA13011，35S启动子的。转进去了，目的基因没有表达，而HYG、GUS却表达了，这种情况多见么？还是说转录出来的RNA立即被非特异性地剪切。头疼~~~
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3楼2013-05-10 17:42:36
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传统人士

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

您好，请问您的转基因烟草是用什么引物进行PCR验证的啊，通用引物还是特异引物呢
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5楼2018-10-16 08:47:00
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