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luizing

银虫 (正式写手)

[求助] 大家帮我看看cDNA图片对吗？

图片：
1，2道是我PCR的结果，条带还是好淡
第3道是cDNA，我觉得看得怎么像RNA啊
4,5道是RNA，今天提的，可能是酒精没晾干，所以加样后漂浮起来了
最后一道是D2000Marker

逆转录的试剂盒是TAKARA的，随机引物。
请问cDNA的条带是这样的吗

做了好久的PCR，条带总是好淡，不知是什么原因？
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知识改变命运
1楼 2010-10-04 16:41:35
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flllgend

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

luizing(金币+1, 博学EPI+1): 2010-10-04 21:57:10
衷心祝福楼主，我为金币而来
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2楼2010-10-04 21:08:49
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

luizing(金币+1): 2010-10-04 21:57:53
luizing(金币+1): 2010-11-01 22:43:27
你的产物是多少bp.其实cDNA根本就没有必要跑胶的，直接RT-PCR就行，条带淡不要紧，关键是不是你的目的带，如果是就用DNA浓缩仪浓缩一下也行，
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爱人者被爱，敬人者人敬
3楼2010-10-04 21:17:22
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

luizing(金币+1): 2010-10-10 21:34:59
luizing(金币+1): 2010-11-01 22:43:41
cDNA很难跑出带来的，估计你看到的条带可能是DNA污染而来。
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4楼2010-10-10 16:58:30
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

luizing(金币+1): 2010-11-01 22:43:55
条带淡给你一个建议，可以把第一次PCR产物纯化或者不纯化，直接取2ul做模板再次PCR，如此重复几次再跑胶很可能拷贝数就上来了，达到你下游实验的要求。
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5楼2010-10-10 21:39:04
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倒霉熊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

cDNA条带就是这样弥散状的，里面有2~3条明显的条带，就是RNA的，是RNA做反转录时量多了，还有很多没有转成cDNA~~~ 不过这样的浓度已经足够做下一步的PCR了，毕竟是2的n次方扩增哈

但你的1,2 PCR结果都有两条带？是引物设计得不是很特异吧？重新设计下引物会好一些。实在不成就切胶回收吧，就是麻烦些~~~
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6楼2012-05-16 14:37:45
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