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zhangxujia

新虫 (初入文坛)

[求助] 转基因烟草DNA可以检测到目的条带,RNA反转录的CDNA进行检测不到目的条带

通过DNA目的条带检测,共得到18株转基因烟草。提取了RNA进行逆转录的进行目的条带的检测,却一株也检测不到。CDNA进行GUS、HYG的验证PCR却是条带有的。已知RNA提取成功,ACTION是有有的。如果说基因没有转进去,那么DNA的目的条带的检测是不可能检测得到,说明是转进去了。会不会是嵌合体,如果是嵌合体那18株一个都没有,这个正常么?求教,各位大侠啊  
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zhangxujia

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by sxxuan at 2013-05-10 14:35:35
看下载体构建有没有问题?
也有可能是转进去了却不表达,所以能检测到DNA却没有逆转录

载体构建是用的pCAMBIA13011,35S启动子的。转进去了,目的基因没有表达,而HYG、GUS却表达了,这种情况多见么?还是说转录出来的RNA立即被非特异性地剪切。头疼~~~
3楼2013-05-10 17:42:36
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sxxuan

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看下载体构建有没有问题?
也有可能是转进去了却不表达,所以能检测到DNA却没有逆转录
你的日子如何,你的力量也必如何!
2楼2013-05-10 14:35:35
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
35S产生的RNA, 就算序列很特殊很短命应该不会马上被讲解得PCR都做不出来吧.
再查查你做出的载体序列, 35S还在?
4楼2013-05-12 00:35:46
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传统人士

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

您好,请问您的转基因烟草是用什么引物进行PCR验证的啊,通用引物还是特异引物呢
5楼2018-10-16 08:47:00
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