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279696866

银虫 (小有名气)

[求助] 我提的质粒跑出来怎么这样的啊

用试剂盒提取的,怎么这个样子啊,酶切完再跑就都没有了啊,第一张是质粒,第二张是酶切好以后的

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[ Last edited by 279696866 on 2013-5-3 at 19:13 ]
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HTGe

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 回帖置顶 2013-05-04 13:19:22
279696866(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-04 13:19:35
质粒提的不纯,或者根本就没提出来你要的质粒;纯的质粒应该是整齐的三条带,最前端的带(超螺旋)最亮;你提的应该不是质粒,很有可能是DNA片段污染,或者是RNA片段污染(检查是否加RNAse),酶切后没有带了说明DNA或RNA片段都降解了。楼上说离子浓度太大,这个是有可能的;记得以前我有个师妹,第一次提质粒,买来的试剂盒洗脱液中没加乙醇,就直接用了,提出来的就是跟你一样的条带;建议楼主再提一次,看看试剂盒中该加的都是都加了没,正常操作应该很简单就能提出来很纯的质粒,祝好运!
8楼2013-05-04 12:33:04
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普通回帖

意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
279696866(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-03 23:14:18
建议从新提取质粒,严格按说明书上操作,控制溶液II的时间和摇动剧烈程度
2楼2013-05-03 23:05:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
上样量有些大,可能含盐量也有些高。
3楼2013-05-04 00:41:31
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279696866

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 意孤城_ at 2013-05-03 23:05:35
建议从新提取质粒,严格按说明书上操作,控制溶液II的时间和摇动剧烈程度

为何酶切好了以后会成这样啊
4楼2013-05-04 10:49:49
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279696866

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-04 00:41:31
上样量有些大,可能含盐量也有些高。

为何酶切好了以后会没有条带啊
5楼2013-05-04 10:50:04
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 279696866 at 2013-05-04 10:50:04
为何酶切好了以后会没有条带啊...

个人觉得你这个根本就不是你需要的质粒,正常情况下至少能看到2条带都很亮,你的只有一条
6楼2013-05-04 11:32:53
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意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-04 00:41:31
上样量有些大,可能含盐量也有些高。

和盐量没关系吧,质粒感觉就不正确
7楼2013-05-04 11:33:46
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137167741

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
感觉你没有提到你的目的质粒,只是一些杂质。
总有一天我要修改用户名。
9楼2013-05-04 13:41:00
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 279696866 at 2013-05-04 10:50:04
为何酶切好了以后会没有条带啊...

用的什么酶切的,单酶切还是双酶切?有可能是酶的问题,或者buffer的问题。你用相同的酶切别的质粒也是这种情况吗?
10楼2013-05-05 01:56:43
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