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9号逐梦客

新虫 (正式写手)

[求助] 半定量PCR技术

大家好，关于半定量PCR的一点小知识，请教一下，一个是我通过调整PCR前的cDNA的量来使内参一致，然后跑胶；还有一种就是PCR前cDNA上样量一样，跑胶的时候通过跑胶的上样量调整内参的亮度来做，不知道这样是否正确科学。大家指导一下。这两个方法哪个正确，还是都正确？小弟谢过。
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为了梦想不断坚持在路上
1楼 2013-05-02 22:30:11
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回帖置顶 ( 共有1个 )

wodezxn

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
9号逐梦客(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:20:39
gyesang: 回帖置顶 2013-05-15 03:20:40
有个好方法，同一个体系同时扩增目的基因和内参！
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7楼2013-05-14 16:50:11
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czfscf

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:19:56
第二种应该不正确吧，多主观啊。第一种的话，不是每次cdna都是等同的吗，额。。。。。你没有内参基因吗 跟自身的内参基因比就行了啊
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Ecological Genomics；the scientific walking hormone
2楼2013-05-03 09:34:59
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9号逐梦客

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by czfscf at 2013-05-03 09:34:59
第二种应该不正确吧，多主观啊。第一种的话，不是每次cdna都是等同的吗，额。。。。。你没有内参基因吗 跟自身的内参基因比就行了啊

如果按照第一种做，调整之后一般是cDNA不一样的，我有内参的啊，但是要通过调整把它们调一样才可以做啊。
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为了梦想不断坚持在路上
3楼2013-05-03 13:38:55
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czfscf

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 9号逐梦客 at 2013-05-03 13:38:55
如果按照第一种做，调整之后一般是cDNA不一样的，我有内参的啊，但是要通过调整把它们调一样才可以做啊。...

要一样么 每个样都是把目的基因去掉内参之后的值，干吗必须要内参一样？不懂，我也质疑一下。你用的2代尔塔代尔塔法算的吗
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Ecological Genomics；the scientific walking hormone
4楼2013-05-03 15:13:33
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ivysmile

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-15 03:20:06
第一个可靠
内参基因循环数不应太多的，达到了平台期 体现不出来了
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5楼2013-05-14 11:17:03
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9号逐梦客

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ivysmile at 2013-05-14 11:17:03
第一个可靠
内参基因循环数不应太多的，达到了平台期 体现不出来了

谢谢啊，做之前，循环数我都有调整过的，不会达到平台期。
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为了梦想不断坚持在路上
6楼2013-05-14 12:19:52
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9号逐梦客

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wodezxn at 2013-05-14 16:50:11
有个好方法，同一个体系同时扩增目的基因和内参！

呵呵，这个建议不错，谢谢啊，但是这样还需要重新设计引物，还需要验证引物的特异性，不过也不是不可以呢。
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为了梦想不断坚持在路上
8楼2013-05-14 18:42:58
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wodezxn

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 9号逐梦客 at 2013-05-14 18:42:58
呵呵，这个建议不错，谢谢啊，但是这样还需要重新设计引物，还需要验证引物的特异性，不过也不是不可以呢。...

内参和目的基因的退火温度本来就应该是一致的，保证同样的体系和扩增效率
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9楼2013-05-16 11:17:07
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