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魍魉人生银虫 (小有名气)
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[交流]
如何完整的研究一个基因的功能已有4人参与
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| 现在想研究下一个基因的功能，这个基因在人上面已经有研究了，但是在我要做的动物上还没有人做，但是有全基因组序列，那么请问我可以从哪些方面来研究这个基因的功能？分子？细胞？个体？具体可以进行哪些实验？或者有没有较全面的参考文献？ |
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 分子生化实验经验积累 | 我的地盘你做主 |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-11 21:42:53
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-11 21:42:53
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这个问题可大了。我觉得每个人能说一部分，但是说全了太难了，遗传学的研究方法足以写一本书。我想到这些： 应用半定量RT-PCR、定量PCR、原位杂交、免疫组化等方法了解基因的时空表达谱。知道基因什么时间在什么组织表达是了解其功能的基本。 在动物上 过表达/敲除或敲落 系统地分析表型，进一步分析机制。考虑到基因表达的时间空间特异性，这种人工的上调或下调基因表达就有了许多种时间、空间的组合，可能会得到不同的结果，当然这些结果不一定矛盾，而可以是互补的。 如果基因的功能域不清楚，可以在了解主要表型的基础上截短、缺失基因的一部分，以发现和了解各功能域的功能。 但以上方法的存在缺点。改变目的基因表达水平可能会导致一些后续变化，使生物过程偏离正常状态，从中既可以进行分析了解其功能，也可能从变化了的生物体中得到异于实际情况的错误结论。 |
2楼2012-12-04 12:58:51
3楼2012-12-04 16:04:45
4楼2012-12-05 10:29:44
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-11 21:43:07
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-11 21:43:07
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你的意思是研究编码这个蛋白的基因的功能？ 那大致包含基因的转录调控，转录后调控，翻译后修饰等等。在找到表型之前，这些还都不足以成为你研究的兴趣。我建议的第一步是了解这个基因的时间空间表达谱（转录水平和蛋白水平），从这里可以猜测基因的功能。 接下来，基因的发育生物学研究主要都从过表达、敲除或敲落或干扰或过表达显性负效突变体，然后观察表型开始（个体水平）。既然你的兴趣是发育调控，要确认此蛋白对发育有调控作用。根据蛋白的类型，如转录因子，就通过研究它结合什么DNA，结合哪些蛋白逐步细化对其功能的认识；如果是受体，是哪一类受体，它在哪里定位，结合哪些配体，自身是否跨膜，是否会转移定位，下游结合哪些蛋白；如果是酶，它结合什么底物，不一而足。 我觉得做发育生物学的研究重点是从表型出发，找到表型可能会很难，找到之后针对表型做分析，你自然会确定深入的方向。 [ Last edited by chriscda on 2012-12-5 at 11:49 ] |
5楼2012-12-05 11:45:49
6楼2013-12-07 22:47:08