24小时热门版块排行榜    

查看: 2096  |  回复: 8

9号逐梦客

新虫 (正式写手)

[求助] 半定量PCR技术

大家好,关于半定量PCR的一点小知识,请教一下,一个是我通过调整PCR前的cDNA的量来使内参一致,然后跑胶;还有一种就是PCR前cDNA上样量一样,跑胶的时候通过跑胶的上样量调整内参的亮度来做,不知道这样是否正确科学。大家指导一下。这两个方法哪个正确,还是都正确?小弟谢过。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

为了梦想不断坚持在路上
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czfscf

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 03:19:56
第二种应该不正确吧,多主观啊。第一种的话,不是每次cdna都是等同的吗,额。。。。。你没有内参基因吗 跟自身的内参基因比就行了啊
Ecological Genomics;the scientific walking hormone
2楼2013-05-03 09:34:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9号逐梦客

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by czfscf at 2013-05-03 09:34:59
第二种应该不正确吧,多主观啊。第一种的话,不是每次cdna都是等同的吗,额。。。。。你没有内参基因吗 跟自身的内参基因比就行了啊

如果按照第一种做,调整之后一般是cDNA不一样的,我有内参的啊,但是要通过调整把它们调一样才可以做啊。
为了梦想不断坚持在路上
3楼2013-05-03 13:38:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czfscf

金虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 9号逐梦客 at 2013-05-03 13:38:55
如果按照第一种做,调整之后一般是cDNA不一样的,我有内参的啊,但是要通过调整把它们调一样才可以做啊。...

要一样么 每个样都是把目的基因去掉内参之后的值,干吗必须要内参一样?不懂,我也质疑一下。你用的2代尔塔代尔塔法算的吗
Ecological Genomics;the scientific walking hormone
4楼2013-05-03 15:13:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ivysmile

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 03:20:06
第一个可靠
内参基因循环数不应太多的,达到了平台期 体现不出来了
5楼2013-05-14 11:17:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9号逐梦客

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ivysmile at 2013-05-14 11:17:03
第一个可靠
内参基因循环数不应太多的,达到了平台期 体现不出来了

谢谢啊,做之前,循环数我都有调整过的,不会达到平台期。
为了梦想不断坚持在路上
6楼2013-05-14 12:19:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wodezxn

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
9号逐梦客(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-15 03:20:39
gyesang: 回帖置顶 2013-05-15 03:20:40
有个好方法,同一个体系同时扩增目的基因和内参!
7楼2013-05-14 16:50:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

9号逐梦客

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by wodezxn at 2013-05-14 16:50:11
有个好方法,同一个体系同时扩增目的基因和内参!

呵呵,这个建议不错,谢谢啊,但是这样还需要重新设计引物,还需要验证引物的特异性,不过也不是不可以呢。
为了梦想不断坚持在路上
8楼2013-05-14 18:42:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wodezxn

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 9号逐梦客 at 2013-05-14 18:42:58
呵呵,这个建议不错,谢谢啊,但是这样还需要重新设计引物,还需要验证引物的特异性,不过也不是不可以呢。...

内参和目的基因的退火温度本来就应该是一致的,保证同样的体系和扩增效率
9楼2013-05-16 11:17:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 9号逐梦客 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +8 archvillain 2026-08-15 15/750 2026-08-15 16:23 by 医学老男孩
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +27 医学老男孩 2026-08-13 58/2900 2026-08-15 15:57 by GZUZM
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 5/250 2026-08-15 14:58 by QXtWNz7PI7wZ
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 3/150 2026-08-15 14:53 by QXtWNz7PI7wZ
[博后之家] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:41 by KxMI1BYBxWX1
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 k0dTPqJtl0jt 2026-08-14 3/150 2026-08-15 12:33 by KxMI1BYBxWX1
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 HFw0lei2R37i 2026-08-14 9/450 2026-08-15 11:33 by KxMI1BYBxWX1
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 7lpolszZVXgi 2026-08-14 6/300 2026-08-15 09:28 by sunzitan
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 7lpolszZVXgi 2026-08-14 5/250 2026-08-15 04:41 by 4wMiSEwB6436
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-15 00:16 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 HFw0lei2R37i 2026-08-14 5/250 2026-08-14 22:32 by 4wMiSEwB6436
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
请填处理意见