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zhuqinjian金虫 (小有名气)
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SaII和BamHI双酶切切不开
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| 我用T载体与目的片段连接后，导入JM109中，用菌落PCR也能P出目的片段，提取质粒后PCR也能P出来，电泳跑出来的片段也正确（环状片段跑出来有3条带），但是用SaII和BamHI双酶切就是切不出来，只有一条带。求大神指导啊？是不是只是单酶切了啊？为啥双酶切切不出来呢？ |
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8601
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【答案】应助回帖
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zhuqinjian: 金币+6, ★★★很有帮助, 有可能是这个原因，现在还在试一次 2013-05-03 09:13:09
zhuqinjian(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！SalI确实不好用，不管是哪个公司的！ 2013-05-03 20:22:59
gyesang: 回帖置顶 2013-05-03 20:23:11
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gyesang: 回帖置顶 2013-05-03 20:23:11
| SalI 这个酶感觉活性不如其他酶。 可能你的DNA里面有些杂质，抑制了SalI的活性。我曾经遇到过这样的情况，做了几个miniprep, 用bamHI 和 XhoI 都能切开，用SalI 时有的能全部切开，有时只有很微弱的带子，有的压根切不开。如果你非要用SalI，建议你先做下乙醇沉淀 （记得要加糖原），这样DNA会比较干净，比较容易被切开。 |
7楼2013-05-03 06:40:07
stevenshi021
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