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aoda123

木虫 (正式写手)

[求助] 基因缺失的载体构建

我需要在目的片段上去掉一小段碱基,然后把剩余部分构建到载体上,该怎么做呢?求经验分享!!!
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身体健康,工作顺利
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aoda123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuyuetq at 2013-04-12 02:08:34
你这个需要应用重叠PCR的方法,像楼上说的把你的目的片段分成三部分,中间部分为你要去掉的,分别设计4个引物,其中中间的引物需要有一部分的重叠片段,PCR3次即可得到去掉一部分碱基的重叠片段,之后酶切连接到你的 ...

谢谢哈!!
身体健康,工作顺利
4楼2013-04-12 08:39:31
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
aoda123(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-12 08:34:34
ABC B是要去掉的
PCR A&C 中间有一段引物长度的overlap
fusion PCR A+C
2楼2013-04-11 21:24:44
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liuyuetq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
aoda123(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-12 08:32:48
你这个需要应用重叠PCR的方法,像楼上说的把你的目的片段分成三部分,中间部分为你要去掉的,分别设计4个引物,其中中间的引物需要有一部分的重叠片段,PCR3次即可得到去掉一部分碱基的重叠片段,之后酶切连接到你的质粒上就可以了,你这个是做基因敲出吧,看一下这个文章,你就会更加清楚我所表述的了,这里没法画图给你,希望能帮上忙。
用你的心情过好我的每一天!
3楼2013-04-12 08:08:34
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aoda123

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-04-11 15:24:44
ABC B是要去掉的
PCR A&C 中间有一段引物长度的overlap
fusion PCR A+C

谢谢了,刚开始做,请多指教!!
身体健康,工作顺利
5楼2013-04-12 08:40:27
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