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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 利用Ri质粒介导的基因转化， 构建植物的双元表达载体
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Bella0224

金虫 (小有名气)

[求助] 利用Ri质粒介导的基因转化， 构建植物的双元表达载体

各位虫友，我现在在做有关于Ri质粒介导的基因转化，利用毛状根（发状根）来进行检测，看文献一般构建的都是植物双元表达载体
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1楼 2013-03-14 14:06:25
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Bella0224

金虫 (小有名气)
看文库的一篇文章，说双元表达载体包含两部分，一部分是缺失T-DNA区域，主要提供Vir基因，用来激活T-DNA的转移；还有一部分是含T-DNA，成为小Ti

我现在有一个载体，pRI909，购自于Takara，它是缺乏vir基因，来源于Ri质粒，抗性为卡那，表达基因是NPI 111 ，正好是我现在希望做的

那么我是否直接将我的目的基因连接于这个表达载体的MCS区呢？连接完了以后就直接转到农杆菌就能表达么？还是需要再连接别的东西呢？是否还需要找一个含Vir的载体，将Vir区域切下呢？

等将来侵染植物长出毛状根，是否就包含我这个载体呢？

期待虫友们的回复~~
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2楼2013-03-14 14:06:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Bella0224: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-16 16:42:25
一是不知怎么讲起了，干脆提供给楼主一些基础文章看看吧
http://dl.vmall.com/c0z29n9zih
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植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
3楼2013-03-14 17:25:32
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lantian1007

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Bella0224: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-16 16:43:22
可以直接连在MCS，但是一般先转大肠杆菌，然后用质粒转农杆菌，然后侵染植物，然后得检测转化成功没
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4楼2013-03-15 22:07:37
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Bella0224

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lantian1007 at 2013-03-15 22:07:37
可以直接连在MCS，但是一般先转大肠杆菌，然后用质粒转农杆菌，然后侵染植物，然后得检测转化成功没

目的基因是公司全合成的，这样的话还需要转T载体后再连接到我的表达载体上么？
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5楼2013-03-16 16:43:14
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lantian1007

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Bella0224 at 2013-03-16 16:43:14
目的基因是公司全合成的，这样的话还需要转T载体后再连接到我的表达载体上么？...

一，看你的目的基因多不多，多的话随便连，一般也很容易的。二，看要有合适的位点才能直接连
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6楼2013-03-17 01:33:41
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