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Bella0224

金虫 (小有名气)

[求助] 利用Ri质粒介导的基因转化, 构建植物的双元表达载体

各位虫友,我现在在做有关于Ri质粒介导的基因转化,利用毛状根(发状根)来进行检测,看文献一般构建的都是植物双元表达载体
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Bella0224

金虫 (小有名气)

看文库的一篇文章,说双元表达载体包含两部分,一部分是缺失T-DNA区域,主要提供Vir基因,用来激活T-DNA的转移;还有一部分是含T-DNA,成为小Ti

我现在有一个载体,pRI909,购自于Takara,它是缺乏vir基因,来源于Ri质粒,抗性为卡那,表达基因是NPI 111 ,正好是我现在希望做的

那么我是否直接将我的目的基因连接于这个表达载体的MCS区呢?连接完了以后就直接转到农杆菌就能表达么?还是需要再连接别的东西呢?是否还需要找一个含Vir的载体,将Vir区域切下呢?

等将来侵染植物长出毛状根,是否就包含我这个载体呢?

期待虫友们的回复~~
2楼2013-03-14 14:06:34
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starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Bella0224: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-03-16 16:42:25
一是不知怎么讲起了,干脆提供给楼主一些基础文章看看吧
http://dl.vmall.com/c0z29n9zih
植物生理群69993869,为避免广告,申请加入请提供木虫昵称,院校及专业信息
3楼2013-03-14 17:25:32
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lantian1007

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Bella0224: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-03-16 16:43:22
可以直接连在MCS,但是一般先转大肠杆菌,然后用质粒转农杆菌,然后侵染植物,然后得检测转化成功没
4楼2013-03-15 22:07:37
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Bella0224

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lantian1007 at 2013-03-15 22:07:37
可以直接连在MCS,但是一般先转大肠杆菌,然后用质粒转农杆菌,然后侵染植物,然后得检测转化成功没

目的基因是公司全合成的,这样的话还需要转T载体后再连接到我的表达载体上么?
5楼2013-03-16 16:43:14
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lantian1007

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by Bella0224 at 2013-03-16 16:43:14
目的基因是公司全合成的,这样的话还需要转T载体后再连接到我的表达载体上么?...

一,看你的目的基因多不多,多的话随便连,一般也很容易的。二,看要有合适的位点才能直接连
6楼2013-03-17 01:33:41
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