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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因缺失的载体构建
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aoda123

木虫 (正式写手)

[求助] 基因缺失的载体构建

我需要在目的片段上去掉一小段碱基，然后把剩余部分构建到载体上，该怎么做呢？求经验分享！！！
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身体健康，工作顺利
1楼2013-04-11 16:53:53
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liuyuetq

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aoda123(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天 2013-04-12 08:32:48
你这个需要应用重叠PCR的方法，像楼上说的把你的目的片段分成三部分，中间部分为你要去掉的，分别设计4个引物，其中中间的引物需要有一部分的重叠片段，PCR3次即可得到去掉一部分碱基的重叠片段，之后酶切连接到你的质粒上就可以了，你这个是做基因敲出吧，看一下这个文章，你就会更加清楚我所表述的了，这里没法画图给你，希望能帮上忙。
赞一下(2人) 回复此楼
用你的心情过好我的每一天！
3楼2013-04-12 08:08:34
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
aoda123(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-12 08:34:34
ABC B是要去掉的
PCR A&C 中间有一段引物长度的overlap
fusion PCR A+C
赞一下(3人) 回复此楼
2楼2013-04-11 21:24:44
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuyuetq at 2013-04-12 02:08:34
你这个需要应用重叠PCR的方法，像楼上说的把你的目的片段分成三部分，中间部分为你要去掉的，分别设计4个引物，其中中间的引物需要有一部分的重叠片段，PCR3次即可得到去掉一部分碱基的重叠片段，之后酶切连接到你的 ...

谢谢哈！！
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身体健康，工作顺利
4楼2013-04-12 08:39:31
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aoda123

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Haibara_Ai at 2013-04-11 15:24:44
ABC B是要去掉的
PCR A&C 中间有一段引物长度的overlap
fusion PCR A+C

谢谢了，刚开始做，请多指教！！
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身体健康，工作顺利
5楼2013-04-12 08:40:27
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